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公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
焦亞硫酸鈉溶液 | 10ml | FS-R7517 |
產品分類:酶抑制劑
儲存條件:—20℃,避光 ,12個月
用途:蛋白酶抑制劑
注意事項:工作濃度0.1mmol/L
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。
禾谷鐮刀菌ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體Anti-DDR2 Antibody早期生長應答因子3(EGR3)
根瘤菌鳥核苷交換因子rasgef1a抗體Anti-DDT Antibody早期生長應答因子2(EGR2)
樺褶孔菌胰腺癌轉移相關蛋白RLLM1抗體Anti-DDT Antibody早期生長應答因子1(EGR1)
枯草芽孢桿菌環(huán)指蛋白45/自分泌運動因子受體抗體Anti-DDX4 Antibody早期內體抗原1(EEA1)
相鄰小孔菌維甲相關孤兒受體α抗體Anti-DDX3X Antibody早期B-因子2(EBF2)
釀酒酵母維甲相關孤兒受體γ抗體Anti-DDX1 Antibody早期B-因子1(EBF1)
孔狀短小莖點霉癌基因RAS相關蛋白Rab4A抗體Anti-DDX4 Antibody早老2(PS2)
香菇ATP調節(jié)離子通道ROM K抗體Anti-DDX4 Antibody早老1(PSEN1)
黑青霉ras基因相關蛋白Rab24抗體Anti-DDX5 Antibody再生胰島衍生蛋白3γ(REG3γ)
固氮野野村氏菌視黃脫氫10抗體Anti-DDX5 Antibody再生胰島衍生蛋白3α(REG3α)
異型薄孔菌Ras蛋白腦組織同源類似物RHEB蛋白抗體Anti-DDX6 Antibody再生胰島衍生蛋白1β(REG1β)
桔橙小單孢菌原癌基因相關蛋白RAP2B抗體Anti-DDX5 Antibody再生蛋白1(NEO1)
禾谷鐮刀菌視網膜母瘤結合蛋白5抗體Anti-DEFB1 Antibody載脂蛋白O(APOO)
釀酒酵母Rho相關蛋白激2抗體Anti-DDX58 Antibody載脂蛋白M(APOM)
盤長孢狀盤孢核糖核苷還原亞基R2抗體Anti-DEFA1 Antibody載脂蛋白L6(APOL6)
硝鹽還原海桿菌Runx3抗體Anti-DELE1 Antibody載脂蛋白L5(APOL5)
: 46(1960)資源名稱: 傷菌 質量規(guī)格:>98%,BR
IFO0206資源名稱: 釀酒酵母 質量規(guī)格:BR,>98%,油狀
木霉Trichoderma│piluliferum J. Webster & Rifai 質量規(guī)格:0.98
焦亞硫酸鈉溶液ASPP1/FITC 熒光su標記p53凋亡刺激蛋白1IgG規(guī)格: 0.2ml
ASPP2/FITC 熒光su標記P53凋亡刺激蛋白2IgG規(guī)格: 0.2ml
AT/AGT /FITC 熒光su標記血管緊張su原IgG規(guī)格: 0.2ml
AT1/FITC 熒光su標記血管緊張suIIgG規(guī)格: 0.2ml
AT1R/FITC 熒光su標記血管緊張suⅡ-1型受體IgG規(guī)格: 0.2ml
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。