詳細介紹
產(chǎn)品分類:DNA溶液
儲存條件:室溫,12個月
用途:質粒制備溶液
注意事項:主要由Tris、氯化鈉、EDTA、Triton X-100組成。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
STET裂解液 | 100ml | FS-R7336 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
雅致小克銀漢霉基末端激3抗體Human PRTFDC1 ELISA Kit胰島受體β(ISR-β)
黃柄曲霉磷化活化蛋白激B抗體Human PRRT1 ELISA Kit胰島受體α(INSRA)
棲土曲霉JmjC結構域組蛋白去甲基化H3-K36抗體Human PSMA1 ELISA Kit胰島生長因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)
黑化鏈霉菌組蛋白去甲基化JARID2抗體Human PRPF8 ELISA Kit胰島生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)
環(huán)帶毛霉JAK和微管相互作用蛋白2抗體(JAK和微管相互作用蛋白2)Human PRUNE ELISA Kit胰島抗體(Anti-Ins)
麥芽糖假絲酵母活化蛋白激B抗體Human PRPH2 ELISA Kit胰島降解(IDE)
分枝枝頂孢磷化蛋白酪激JAK-2抗體Human PRPSAP2 ELISA Kit胰島(INS)
芽孢桿菌凋亡清除受體抗體Human PRPS1L1 ELISA Kit胰島淀粉樣多肽(IAPP)
彎孢菌磷化原癌基因c-Jun抗體Human PRPS1 ELISA Kit原激活肽(TAP)
副豬嗜血桿菌Notch配體Jagged 2蛋白抗體Human PRR13 ELISA Kit原Ⅱ(Try-Ⅱ)
雪腐鐮孢組蛋白去甲基化Jarid1C抗體Human C13orf33(Uncharacterized protein C13orf33) ELISA Kit(trypsin)
香港科恩氏菌組蛋白去甲基轉移JMJD1B抗體Human PRUNE ELISA Kit衣原體蛋白樣活性因子(CPAF)
可可鏈霉菌可可亞種親聯(lián)蛋白2抗體Human PRPF8 ELISA Kit一氧化碳血紅蛋白(HbCO)
地衣芽胞桿菌驅動蛋白家族蛋白13B抗體Human PRPH2 ELISA Kit一氧化化氮(NO)
蘇云金芽胞桿菌日本亞種驅動蛋白家族蛋白7抗體Human PRMT6 ELISA Kit一氧化氮合(NOS)
地生翅孢殼CREB結合蛋白抗體Human PRMT8 ELISA Kit一氧化氮合成(NOS)
芒弗里亞擬盤多毛孢Pestalotiopsis│mangifolia 質量規(guī)格:>98.0%(N)(T)馬錢苷
光神農球菌Agrococcus│baldri 質量規(guī)格:>97.0%(GC)蝙蝠葛堿
新月彎孢Curvularia│lunata 質量規(guī)格:>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標記濱蒿內酯
STET裂解液IGF-1 ELISA Kit 大鼠胰島su樣生長因子1規(guī)格: 48T
IFN- Gamma ELISA Kit 大鼠γ干擾su規(guī)格: 48T
ICAM-1/CD54 ELISA KIT 大鼠細胞間粘附分子1規(guī)格: 48T
GM-CSF ELISA Kit 大鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子規(guī)格: 48T
GDNF ELISA Kit 大鼠膠質細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子規(guī)格: 48T