化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
PEG1000溶液 | 10ml | FS-R6387 |
產(chǎn)品分類：細(xì)胞培養(yǎng)
儲(chǔ)存條件 4℃,6個(gè)月
用途 聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，可用作融合劑,以獲得單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞雜交
注意事項(xiàng) 無菌溶液,由DPBS(pH7.4)和PEG1000或稱聚乙二醇1000組成,經(jīng)無菌處理。體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可以做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細(xì)胞。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；
EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。
配制步驟：
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定：
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
opiorphin(opiorphin)opiorphin ELISA KitBTBD6蛋白抗體包裝5g
N-乙?；?絲酰-天門冬酰-賴酰-脯(AcSDKP)AcSDKP ELISA KitBMP內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25g
N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷(NAG)NAG ELISA Kit肝病NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體包裝5g
N端前腦鈉(NT-proBNP)NT-proBNP ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切抗體包裝1g
NANOG同源域蛋白(NANOG)NANOG ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體包裝5g
NAD依賴性蛋白脫乙酰sirtuin-1(SIRT1)SIRT1 ELISA Kit微管蛋白β輔助因子D抗體包裝25g
NADPH氧化1(NOX1)NOX1 ELISA Kit鈣粘蛋白相關(guān)蛋白受體BTR1抗體包裝5g
M型肌激(CKM)CKM ELISA Kit有絲分裂蛋白BUB3抗體包裝1g
MAP激活化蛋白激2(MAPKAPK2)MAPKAPK2 ELISA Kitp60TRP蛋白抗體包裝5g
L選擇(L-Selectin/CD62L)L-Selectin/CD62L ELISA Kit博萊霉解抗體包裝1g
L-乳脫氫A鏈(LDH-A)LDH-A ELISA Kit短蛋白聚糖抗體包裝5g
L解(PAL)PAL ELISA KitBTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝10MG
Klotho(Klotho)Klotho ELISA Kit巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白12抗體包裝100g
KI-67抗原(MKI67)MKI67 ELISA Kit堿性亮鏈蛋白BZW1抗體包裝25g
I型膠原蛋白(COL-1)COL-1 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B抗體包裝5g
ASH1蛋白抗體肝核因子1β(HNF1β)CWHM-12是αV整聯(lián)蛋白的有效抑制劑，抑制αvβ8，αvβ3，αvβ6和αvβ1的 IC50 值分別為0.2，0.8，1.5，1.8 nM。
PEG1000溶液EAAT2/FITC 熒光標(biāo)記抗膠質(zhì)谷氨運(yùn)載蛋白2IgG三 GR,99.5%
EAAT3/FITC 熒光標(biāo)記抗膠質(zhì)谷氨運(yùn)載蛋白3IgG三 用于氨分析, ≥99.5% (GC)
EAG1/FITC 熒光標(biāo)記離子通道蛋白EAG1IgG三 LC-MS淋洗劑, ≥99.5% (GC)
EBNA-3/FITC 熒光標(biāo)記EB病核抗原-3IgG(R)-(-)-3--1,2- 97%
E-cadherin/FITC 熒光標(biāo)記E-鈣粘附分子IgG(S)-(+)-3--1,2- 97%
ECE1/FITC 熒光標(biāo)記內(nèi)皮轉(zhuǎn)化1IgG(±)-環(huán)氧 96%
ECE2/FITC 熒光標(biāo)記抗內(nèi)皮轉(zhuǎn)化2IgG氨比林 CP
ECG2/FITC 熒光標(biāo)記食道癌相關(guān)因IgG土霉 97%
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。
1） 第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2） 根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5） 按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1） 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3） 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
化工儀器網(wǎng)