雙鏈DNA中和緩沖液公司正在銷售的產(chǎn)品：Anti-RPL15 AntibodyHpt/HP小鼠16α羥基雌酮1
Anti-RPL12 Antibody人抗載脂蛋白抗體A1
Anti-RPL18 Antibody小鼠α1酸性糖蛋白
Anti-RPL14 Antibody大鼠25羥基
Anti-RPL26L1 Antibody人抗胰島素受體抗體
Anti-RPL27A Antibody人抗胃

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：核酸雜交

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：又稱為中性轉(zhuǎn)移緩沖液,僅用于雙鏈DNA的雜交

注意事項(xiàng)：由tris-hcl、氯化鈉組成。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

樟疫霉粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA Kit人抗增殖核抗原抗體(PCNA)

貝倫格勒座腔菌梨專化型粘蛋白4抗體Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA Kit人抗載脂蛋白抗體A1(Apo A1)

釀酒酵母v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗體Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA Kit人抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/T活化蛋白(TAP)

Phoma medicaginis var. medicaginis基質(zhì)金屬蛋白-10抗體Human PENK(Proenkephalin-A) ELISA Kit人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)

松乳菇突變型P53抗體Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA Kit人抗異質(zhì)型核糖核蛋白抗體/抗RA33抗體(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)

黃蓋蜜環(huán)菌蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體Human ARSA(Arylsulfatase A) ELISA Kit人抗胰島受體抗體(AIRA)

粉狀畢赤氏酵母基質(zhì)金屬蛋白-24抗體Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA Kit人抗(AT)

黑絡(luò)丸巨噬甘露糖受體抗體Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA Kit人抗眼肌抗體(EMAb)

釀酒酵母胃粘液抗體Human ATOH1(Protein atonal homolog 1) ELISA Kit人抗血小板抗體IgM(PA-IgM)

枯草芽孢桿菌基質(zhì)金屬蛋白20抗體Human KLF14(Krueppel-like factor 14) ELISA Kit人抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)

平臍蠕孢菌尿調(diào)節(jié)蛋白抗體Human MYH9(Myosin-9) ELISA Kit人抗血小板抗體IgG(PA-IgG)

根瘤菌肌增強(qiáng)因子2抗體Human AMSH(alpha-MSH) ELISA Kit人抗血小板抗體IgA(PA-IgA)

枯草芽孢桿菌肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體Human PRSS2(Trypsin-2) ELISA Kit人抗血小板抗體(anti-PA Ab)

越南芽孢桿菌神經(jīng)母特異性轉(zhuǎn)移因子抗體Human IL17RB(Interleukin-17 receptor B) ELISA Kit人抗胸腺球蛋白(ATG)

釀酒酵母組織相關(guān)抗原HLA-B15抗體Human CDO1(Cysteine dioxygenase type 1) ELISA Kit人抗信號識別顆?？贵w(SRP)

Gordonia蛋腺苷轉(zhuǎn)移抗體Human CYP2D6(Cytochrome P450 2D6) ELISA Kit人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)

腐生葡萄球菌Staphylococcus│saprophyticus 質(zhì)量規(guī)格：≥30units/mg protein,sigma原裝蒙花苷

細(xì)極鏈格孢蒜生變種Alternaria│tenuissima var. alliicola 質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分沒食子

無乳鏈球菌Streptococcus│agalactiae 質(zhì)量規(guī)格：≥95%,半硫鹽木犀草苷
雙鏈DNA中和緩沖液ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit  小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78規(guī)格： 48T

OLAb(Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody) ELISA KIT  小鼠氧化低密度脂蛋白規(guī)格： 48T

ASMA(Mouse Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit  小鼠抗平滑肌規(guī)格： 48T

M30(Mouse Embryonic Stem MESPU30) ELISA Kit  小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30規(guī)格： 48T

NF-κB p65(Mouse nuclear factor-κB p65) ELISA Kit  小鼠核因子κB亞基p65親和肽規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。