詳細(xì)介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 19號染色體開放閱讀框67抗體 |
英文名稱 | C19orf67 |
規(guī)格 | 0.1ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗、研究實(shí)驗、教學(xué)實(shí)驗、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實(shí)惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實(shí)驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗活體。
3、進(jìn)行動物免疫實(shí)驗。
4、試取血樣進(jìn)行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實(shí)驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
小鼠蛋白酸酶(PP) 北京芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus beijingensis
小鼠硫氧還蛋白還原酶(TrxR) 米曲霉拉丁屬名: Aspergillus oryzae
小鼠硫氧化還原蛋白(Trx) 類諾卡氏菌拉丁屬名: Nocardioides sp.
小鼠膠原酶II(Collagenase II) 毒蠅鵝膏菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
小鼠膠原酶I(Collagenase I) 泡囊短波單胞菌用途: 分類、研究,具有用作耐重金屬基因資源潛力。
小鼠酸化蛋白激酶C(P-PKC) 大腸埃希氏菌拉丁屬名: Escherichia coli
小鼠酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK) Pseudarthrobacter拉丁屬名: Pseudarthrobacter siccitolerans
小鼠鈣通道阻滯劑(CCB) 弗雷德里克斯堡假單胞菌拉丁屬名: Pseudomonas frederiksbergensis
小鼠氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT) 大腸桿菌用途: 獲得來源于Thermus菌屬的耐高溫酶類用于科學(xué)研究及功能檢測
小鼠骨形成蛋白(BMPs) 康氏木霉注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
小鼠視黃結(jié)合蛋白4(RBP-4) 蒼白鹽八疊球菌拉丁屬名: Halosarcina pallida
小鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a) 根瘤菌用途: 與檉麻共生固氮
小鼠戊糖素(Pentosidine) 熒光假單胞菌拉丁屬名: Pseudomonas fluorescens
小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)運(yùn)動節(jié)桿菌拉丁屬名: Arthrobacter agilis
小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL) 皮狀絲孢酵母用途: 利用水解液及廢液培養(yǎng)食用及飼料酵母
19號染色體開放閱讀框67抗體HLF tRNA 淋巴成纖維細(xì)胞總RNA 規(guī)格:
HOK tRNA 口腔角質(zhì)細(xì)胞總RNA 規(guī)格:
HGF tRNA 牙齦成纖維細(xì)胞總RNA 規(guī)格:
HPLF tRNA 牙周膜成纖維細(xì)胞總RNA 規(guī)格:
HEEpiC tRNA 食道上皮細(xì)胞總RNA 規(guī)格:
HESMC tRNA 食道平滑肌細(xì)胞總RNA 規(guī)格:
HIMEC tRNA 腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNA 規(guī)格: