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人生長激素釋放因子GH-RF試劑盒
人生長激素釋放因子GH-RF試劑盒的詳細(xì)介紹：
基本信息
英文名：Human growth hormone relasing factor，GH-RF ELISA Kit
包裝規(guī)格：常見的有 96T/Kit（8×12strips）、48T/Kit（8×6strips）兩種
保存條件：一般需在 2-8℃保存，優(yōu)良溫度為 6℃，有效期通常為 6 個月
檢測原理
固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)：用純化的人生長激素釋放因子（GH-RF）抗體包被微孔板，制成固相抗體。加入待測樣本后，樣本中的 GH-RF 與固相抗體結(jié)合，形成抗原 - 抗體復(fù)合物。再加入 HRP 標(biāo)記的生長激素釋放因子（GH-RF）抗體，與已結(jié)合在固相抗體上的 GH-RF 結(jié)合，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入底物 TMB，TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色，顏色的深淺和樣品中的 GH-RF 含量呈正相關(guān)，通過酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人生長激素釋放因子（GH-RF）的含量。
樣本要求
血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。收集血液后，1000×g 離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g 離心 30 分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液：1000×g 離心 10 分鐘除顆粒和聚合物。
組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g 離心 10 分鐘，取上清液。
操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻，注意不要使液體產(chǎn)生大量泡沫，以免加樣時產(chǎn)生誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔，每個樣品能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品 50μl 于反應(yīng)孔、加入待測樣品 50μl 于反應(yīng)孔內(nèi)，立即加入 50μl 的生wu素標(biāo)記的抗體，蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 45 分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩 30 秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復(fù)此操作 4 次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入 100μl 的親和鏈酶素 - HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 30 分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩 30 秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復(fù)此操作 4 次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物 A、B 各 50μl，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 5 分鐘。
取出酶標(biāo)板，迅速加入 50μl 終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人生長激素釋放因子（GH-RF）的含量。
性能指標(biāo)
檢測范圍：一般為 0.312-20pg/mL。
靈敏度：最小可測 0.15pg/mL。
特異性：可同時檢測重組或天然的待測物質(zhì)，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均 < 10%