用于高靈敏度，高保真熱啟動PCR
?高靈敏度、高特異性
?*的UA/TA克隆
?保真性比Taq DNA Polymerase高10倍
?可在室溫下構建反應體系，酶活化速度快
Qiagen 202602/202605 HotStar HiFidelity Polymerase Kit

Qiagen 202602/202605 HotStar HiFidelity Polymerase Kit 

用于高靈敏度，高保真熱啟動PCR

• 高靈敏度、高特異性

• *的UA/TA克隆

• 保真性比Taq DNA Polymerase高10倍

• 可在室溫下構建反應體系，酶活化速度快

  
  

經(jīng)優(yōu)化的即用型試劑盒包括高保真PCR所需的所有試劑、酶、緩沖液和dNTPs。HotStar HiFidelity DNA Polymerase是一種經(jīng)特異修飾的產(chǎn)生A突出末端的熱啟動校對酶，能夠直接、高效的進行UA/TA克隆。緩沖液中包含F(xiàn)actor SB，可在PCR體系建立時防止引物和模板的降解，提供高特異性和高保真PCR。此外，Q-Solution能夠有效擴增難擴增的模板（如富含GC的模板）。

Performance

HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含一種經(jīng)特異修飾的熱啟動校對酶，可在PCR體系建立時防止引物和模板的降解，提供高保真PCR，無需優(yōu)化。通過檢測，HotStar HiFidelity DNA Polymerase Kit可確保高特異性和高靈敏度擴增（參見"Highly sensitive and reliable PCR"）。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性比Taq DNA polymerase高10倍。新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含專有的Factor SB，提高PCR的靈敏度和可靠性，尤其在起始模板量較少的條件下。該試劑盒同時提供Q-Solution，可進一步優(yōu)化PCR（參見"Amplification of difficult templates"）。

HotStar HiFidelity DNA Polymerase特性

濃度：2.5 units/μl
5'–>3'外切酶活性：否
3'–>5'外切酶活性：是
額外添加A（末端轉移酶活性）：是
半衰期：95°C條件下>4小時
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNase污染：否

Qiagen 202602/202605 HotStar HiFidelity Polymerase Kit 

Principle

通常利用高保真酶3'→5'核酸外切酶的活性去除錯配的整合堿基。但是，該活性會在PCR體系建立和起始時降解引物，而導致非特異性啟動、擴增，甚至擴增產(chǎn)物失敗，尤其在模板量較少的條件下。

HotStar HiFidelity DNA Polymerase

HotStar HighFidelity DNA Polymerase是從新型Pyrococcus spp.中特異分離的，經(jīng)過化學修飾使聚合酶和核酸外切酶失活。5分鐘熱啟動激活酶組分，使PCR起始階段就有高校對能力。*的修飾確保體系建立過程中引物和酶的完整性，防止錯誤啟動。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的可靠性能確保高特異性和高靈敏度的擴增。

HotStar HiFidelity PCR Buffer

新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含*的PCR添加劑，以及濃度已經(jīng)優(yōu)化的dNTPs和MgSO4。Factor SB是一種**的PCR添加劑，提高PCR的靈敏度和可靠性（參見"Highly sensitive and reliable PCR"）。新型的Factor SB可確保模板DNA的完整性，該DNA常常會被具有3'→5'核酸外切酶活性的高保真酶降解。

預優(yōu)化試劑能夠可靠的擴增特異性PCR產(chǎn)物，且出錯率低。該緩沖液通過提高每個PCR擴增退火過程特異性引物的結合比例，確保PCR每個循環(huán)特異性擴增（參見"Increased specificity of primer annealing"）。*的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡組合，使得HotStar HiFidelity PCR Buffer與傳統(tǒng)的PCR緩沖液相比在很寬的溫度和Mg²⁺濃度范圍內都有嚴格的引物退火條件和高度的特異性，無需進行耗時的優(yōu)化。

HotStar HiFidelity PCR Buffer也含有濃度經(jīng)特定優(yōu)化的dNTPs，用于方便的建立PCR反應體系和獲得可靠的結果。該緩沖液zui大程du上增加了HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性，確保低出錯率。HotStar HiFidelity Polymerase Kit靈敏度高、特異性強以及使用HotStar HiFidelity PCR Buffer而無需優(yōu)化的特性使其適合多種高保真PCR應用。

Q-Solution

HotStar HiFidelity Polymerase Kit同時提供Q-Solution，一種新型的PCR添加劑，通過更改DNA熔解行為促進難擴增模板的擴增。這種*的試劑可進一步優(yōu)化由模板引起的表現(xiàn)不理想的PCR，如過多的二級結構和富含GC的模板（參見"Amplification of difficult templates"）。不同于DMSO和其他PCR添加劑，Q-Solution的濃度是確定的，沒有毒性，并且保證PCR的純度。而且PCR中加入Q-Solution不會影響PCR的準確性。

完整的試劑盒規(guī)格

HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含PCR所需的所有組分。無需額外購買其他試劑或緩沖液。

Procedure

HotStar HiFidelity操作流程高效，只需按照試劑盒中已優(yōu)化的試驗方案操作即可。HotStar HiFidelity DNA Polymerase經(jīng)過化學修飾，可以暫時性的使聚合酶和3'–>5'核酸外切酶失活。這種抑制作用可使引物和模板在PCR體系建立和循環(huán)起始階段過度降解。95°C條件下孵育5分鐘即可激活聚合酶和校對活性，可以整合入已有的熱循環(huán)程序。這種修飾確保可在室溫下方便的建立反應體系，而不會影響PCR的特異性和產(chǎn)量。

TA/UA克隆

與其他高保真DNA聚合酶相比，使用HotStar HiFidelity DNA Polymerase獲得的PCR產(chǎn)物可直接用于TA-或UA-克?。▍⒁?Efficient TA/UA cloning"）。

產(chǎn)物的長度和靈敏度

鑒于HotStar HiFidelity Polymerase Kit的高靈敏度，即使使用極微量的起始原料也可擴增片段（如1 ng的人基因組DNA）。使用基因組DNA獲得的產(chǎn)物長度可達5 kb，而λDNA獲得的產(chǎn)物長度可達10 kb，表明HotStar HiFidelity Polymerase Kit適合多種應用，包括用于克隆的長片段DNA的擴增。

Applications

HotStar HiFidelity Polymerase Kit適合多種要求高靈敏度和低出錯率的熱啟動PCR應用，如克隆和定點突變。