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谷氨酸脫氫酶(GLDH)ELISA 試劑盒

谷氨酸脫氫酶(GLDH)ELISA 試劑盒
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  • 型號(hào) GLDH
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更新時(shí)間:2025-02-20 12:06:11瀏覽次數(shù):1130

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谷氨酸脫氫酶(GLDH)ELISA 試劑盒

競(jìng)爭(zhēng)法

  1. 競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,一般用于檢測(cè)小分子抗原,其操作步驟為:

  2. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

  3. 加入待測(cè)檢體,使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)

  4. 加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來。

  5. 洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。

    當(dāng)需要偵測(cè)無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí),一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

    谷氨酸脫氫酶(GLDH)ELISA 試劑盒

  6. 應(yīng)用于ELISA

    親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每個(gè)分子由4個(gè)亞基組成,可以和4個(gè)生物素分子親密結(jié)合。維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制成的衍生物,生物素-羥基琥珀亞胺酯(biotin-hydroxysuccinimide,BNHS)可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素與生物素的結(jié)合,雖不屬免疫反應(yīng),但特異性強(qiáng),親和力大,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個(gè)親和素分子有4個(gè)生物素分子的結(jié)合位置,可以連接更多的生物素化的分子,形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來,就可大提高ELISA的敏感度。

    親和素-生物素系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用有多種形式,可用于間接包被,亦可用于終反應(yīng)放大。可以在固相上先預(yù)包被親和素,原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結(jié)合,通過親和素-生物素反應(yīng)而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量,而且使其結(jié)合點(diǎn)充分暴露。另外,在常規(guī)ELISA中的酶標(biāo)抗體也可用生物素化的抗體替代,然后連接親和素-酶結(jié)合物,以放大反應(yīng)信號(hào)。

  7. 工作原理本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),測(cè)定樣品中的水平。向預(yù)先包被抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的抗體,經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的組分,然后再加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中的濃度呈正相關(guān)。


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