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布氏桿菌毒病抗體檢測ELISA試劑盒
Ceditest Priocheck BRUCELLA AB
布氏桿菌毒病抗體檢測ELISA試劑盒
簡介
一些年來，荷蘭動物科學與健康研究所已經(jīng)建立了控制和消除動物疾病的專門技術和知識體系。依靠對病因病理的基礎性研究，該組織為專門的實驗室和獸醫(yī)服務機構提供了病毒學、細菌學、寄生蟲學和免疫學科研工具。
布氏菌病在世界各地均有發(fā)生，是一種人畜共患病，病原為布氏桿菌（革蘭氏陰性菌），這類細菌包含6種：牛B流產(chǎn)型，羊B. melitensis （3 biovars）, 豬B. suis （5 biovars）, B. ovis, 狗B. canis, B. neotomae and B. maris. 牛是B流產(chǎn)型主要的宿主，，綿羊和山羊是B. melitensis的主要宿主。原則上講，布氏桿菌不同亞型感染動物，臨場癥狀有可比性，且都是繁殖障礙。例如，母畜的流產(chǎn)和不孕公畜的睪丸炎和附睪炎。
人類感染布氏桿菌的癥狀是波浪熱，這對農(nóng)民、實驗室工作人員和屠宰工作人員來說是相當危險的。特別是B. melitensis對人類有高度的致病性，是世界上人畜共患病zui嚴重的病原之一。被污染的山羊奶酪已經(jīng)被頻繁的報道說是感染原。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)展了一些檢測布氏桿菌的血清學方法，膠合測試，補體反應和ELISA’s是應用比較廣泛的確認方法。所有檢測抗體都是針對滑型LPS O鏈的。無論使用那種檢測方法，都應該與注意革蘭氏陽性菌的交叉反應，如Francisella tularensis, Campylobacter, Salmonella, Pasteurella, Yersinia enterocolitica 0:9, Escherichia coli O:117 and 0:156。
感染B流產(chǎn)型和B. melitensis后，會出現(xiàn)IgM抗體，緊跟著會出現(xiàn)IgG抗體（IgG1和IgG2）。本試劑盒就是檢測血清和牛奶中的IgG1抗體，且是一個經(jīng)過Bercovich et al（1990）修正的檢測試劑盒，也符合歐盟64/432的指示標準。
試劑盒有所有檢測是需要的試劑，可以檢測440個樣品或者220個重復的血清樣品。
參考文獻
（1） Bercovich, Z. and Taaijke, R. （1990） Enzyme Immunoassay using monoclonal antibodies for the detection of Brucella abortus antibodies in cow milk. J. Vet. Med. B 37, 735-759.
（2） OIE Manual of standards for Diagnostics Test and Vaccines, Fourth Edition, 2000.
應用
本試劑盒是檢測牛、山羊、綿羊血清和牛奶樣品中布氏桿菌的有效手段。是動物健康免疫程序中檢測個體羊或牛*桿菌抗體的決定性步驟。本試劑盒用來監(jiān)督、確認整個群體是否有*桿菌病的發(fā)生。
檢測原理
本試劑盒是用間接ELISA檢測感染牛、綿羊、山羊的布氏桿菌抗體。用超聲波降解的非活性的布氏桿菌抗原包被酶標板，加血清和牛奶樣品。測試樣品中存在流產(chǎn)型和melitensis抗體，孵化后就會和抗原反應。加帶有HRP的抗Ig的單克隆抗體酶標結合物，就會和抗原抗體結合物中的抗體反應。之后，加底物，如果檢測樣品中有特異性抗體出現(xiàn)，就會有顏色反應。
每板中應使用3個對照血清樣品，分別為陽性、陰性、和一個弱陽性。這三個血清對照已經(jīng)根據(jù)OIE規(guī)定的ELISA標準校對過了。樣品的OD值應該減去空白的OD值，對比1是檢測中zui大的OD值，對比2應該是陰性的，pp<20%,對比3為弱陽性的，pp值應該20－45％。
一般評述
如果沒有前面的注意事項，此說明書的一些內(nèi)容很容易變化。但是此試劑盒自從公布之日起一直都是完整而精確的，所以對使用以上操作方法產(chǎn)生的結果負責。
試劑盒成分
1） 酶標板5塊 5 test plates
2） 濃縮酶標記物，1瓶 conjugate（concentrated）
3） 陽性對照血清，1瓶 1 vial reference serum1（positive）
4） 陰性對照血清，1瓶 1 vial reference serum2（negative）
5） 弱陽性對照血清，1瓶1 vial reference serum（weak positive）
6） 濃縮稀釋緩沖液，1瓶 1 vial dilution buffer（concentrated）
7） 底物液，1瓶（直接使用）1 vial chromogen /substrate （ready to use）
8） 濃縮洗液，1瓶 1 vial washing fluid （concentrated）
9） 終止液，1瓶（直接使用）1 vial stop solution（ready to use）
10） 10個封口膜10 plate sealers
