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轉(zhuǎn)染試劑的使用方法

閱讀:1797      發(fā)布時(shí)間:2022-11-24
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   轉(zhuǎn)染試劑是一種新結(jié)構(gòu)類(lèi)型的DNA轉(zhuǎn)染試劑。該轉(zhuǎn)染試劑為陽(yáng)離子聚合物和脂質(zhì)體的雜合體,具有轉(zhuǎn)染效率高、重復(fù)性好、毒性低和穩(wěn)定性的特點(diǎn),目前該轉(zhuǎn)染試劑為我公司產(chǎn)品。轉(zhuǎn)染試劑用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,如腫瘤細(xì)胞系(常見(jiàn)的細(xì)胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培養(yǎng)的細(xì)胞以及昆蟲(chóng)細(xì)胞sf9,sf21等。轉(zhuǎn)染試劑,1.0ml,可用于24孔板轉(zhuǎn)染333次或者6孔板166次轉(zhuǎn)染操作。
  轉(zhuǎn)染試劑的使用方法:
  1、接種細(xì)胞:
  對(duì)于貼壁細(xì)胞,轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板(不含抗生素),使其在轉(zhuǎn)染時(shí)的密度大約在80%左右。對(duì)于懸浮細(xì)胞,轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板,每500 ?L生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入4~8×105cells。
  2、準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物:
  a、對(duì)于每孔細(xì)胞,將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基),混勻。
  b、對(duì)于每孔細(xì)胞,將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基),輕輕混勻。
  注:無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液,不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因?yàn)镋Z Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過(guò)程不能含有血清。
  c、將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,輕輕混勻。
  d、室溫放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。
  3、轉(zhuǎn)染細(xì)胞:
  a、將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微振蕩,讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。
  b、在37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h,去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液,更換新的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)至對(duì)轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。
  以上就是轉(zhuǎn)染試劑的相關(guān)知識(shí)點(diǎn),希望以上的內(nèi)容能夠?qū)Υ蠹矣兴鶐椭?,感謝您的觀看和支持,后期會(huì)整理更多資訊給大家,敬請(qǐng)關(guān)注我們的網(wǎng)站更新。

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