XL1-Blue Electroporation-Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

XL1-Blue       50μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                                10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                         -80℃（6個(gè)月）

基因型

recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 (r_k^-,m_k⁺), relA1 lac [F' proAB lacI^qZ?M15: Tn10 (Tet^R)]

XL1-Blue Electroporation-Competent Cell產(chǎn)品說明

XL1-Blue電擊感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。XL1-Blue菌株能保證高拷貝質(zhì)粒穩(wěn)定復(fù)制，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdR17突變導(dǎo)致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。 lacI^qZΔM15 的存在使XL1-Blue菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。XL1-Blue電擊感受態(tài)細(xì)胞適用于各種文庫(kù)構(gòu)建，經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×10¹⁰ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的XL1-Blue電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5 分鐘，待其融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手打EP管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。

A. 測(cè)定轉(zhuǎn)化效率使用1 μl 10 pg/μl的對(duì)照質(zhì)粒 pUC19；

B. 對(duì)于連接產(chǎn)物，請(qǐng)用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重懸，DNA濃度不超過100ng/μl，體積不超過5μl/50μl 感受態(tài)。

3. 用200 μl槍頭將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。

4. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。

5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌S.O.C. 培養(yǎng)基（室溫），用1ml槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到50ml離心管（BD Falcon50ml錐形離心管等），向離心管中補(bǔ)加S.O.C. 培養(yǎng)基至5ml。37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘。

6. 5000rpm離心一分鐘收菌，重懸后取100-200 μl涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C平板上（因菌量較大，若全部涂板請(qǐng)選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個(gè)）。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)13-17小時(shí)。