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國(guó)自然熱點(diǎn) | 巨噬細(xì)胞基礎(chǔ)知識(shí)點(diǎn)

閱讀:961      發(fā)布時(shí)間:2023-10-17
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2023年國(guó)自然中標(biāo)熱點(diǎn)已經(jīng)發(fā)布,800+立項(xiàng)數(shù)使巨噬細(xì)胞在生物領(lǐng)域掀起一波熱浪,接下來(lái)小愛(ài)帶大家了解一下巨噬細(xì)胞。


圖1 2023年巨噬細(xì)胞研究熱點(diǎn)

 

巨噬細(xì)胞目前已知的來(lái)源包括

1)從骨髓中的造血干細(xì)胞→祖細(xì)胞,遷移至外周血,分化為常駐單核細(xì)胞和炎癥性單核細(xì)胞,在穩(wěn)定狀態(tài)或炎癥刺激下遷移至特定組織,分化為巨噬細(xì)胞;
2)胚胎發(fā)育過(guò)程中在胎肝、卵黃囊或背主動(dòng)脈附近的胚胎區(qū)域生成。

 

機(jī)體大部分組織都存在巨噬細(xì)胞,如骨巨噬細(xì)胞(破骨細(xì)胞)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(小膠質(zhì)細(xì)胞)、肺泡巨噬細(xì)胞(噬塵細(xì)胞)、肝臟(庫(kù)普弗細(xì)胞)、結(jié)締組織(組織細(xì)胞)以及脾臟中的白髓巨噬細(xì)胞、紅髓巨噬細(xì)胞和邊緣區(qū)巨噬細(xì)胞等。


圖2 巨噬細(xì)胞發(fā)育

 

巨噬細(xì)胞功能概述

 

1)巨噬細(xì)胞是具有吞噬作用的細(xì)胞類型之一,參與非特異性免疫,能夠識(shí)別、吞噬并降解細(xì)胞碎片和病原體;
2)通過(guò)遞呈抗原以及誘導(dǎo)其他遞呈細(xì)胞表達(dá)共刺激分子等,啟動(dòng)適應(yīng)性免疫反應(yīng);
3)炎癥初期,通過(guò)釋放細(xì)胞因子和趨化因子募集其他免疫細(xì)胞。

 

巨噬細(xì)胞分型:

 

根據(jù)功能不同巨噬細(xì)胞一般分為兩類,與宿主防御和促炎癥反應(yīng)相關(guān)的“經(jīng)典激活"的1型巨噬細(xì)胞,由脂多糖(LPS)誘導(dǎo),能夠產(chǎn)生促炎反應(yīng)并產(chǎn)生促炎相關(guān)因子,如IL-6、IL-12和腫瘤壞死因子(TNF),并且過(guò)表達(dá)CD80、CD86和CD16/32。以及與免疫調(diào)節(jié)和修復(fù)相關(guān)的“旁路激活"的2型巨噬細(xì)胞,由白細(xì)胞介素4(IL-4)誘導(dǎo),過(guò)表達(dá)精氨酸酶-1(Arg-1)、甘露糖受體(CD206)、抗炎因子(IL-10)以及趨化因子CCL17和CCL22等。

 

巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)分化方案:



圖3 THP-1分化為巨噬細(xì)胞

 

常用來(lái)做巨噬細(xì)胞分型誘導(dǎo)的是THP-1(人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞),相關(guān)培養(yǎng)問(wèn)題在往期“THP-1細(xì)胞培養(yǎng)攻略"中可以查看,今天我們聊一聊此細(xì)胞誘導(dǎo)分化的問(wèn)題。

 

THP-1誘導(dǎo)為M1型巨噬細(xì)胞:

 

1)離心收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的THP-1,棄上清,用1640培養(yǎng)基重懸,調(diào)整細(xì)胞密度為5×105/mL,六孔板每孔接種2mL,加入PMA(佛波脂abs9107,150ng/mL)培養(yǎng)48h,誘導(dǎo)成為巨噬細(xì)胞,顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞貼壁,細(xì)胞形態(tài)由圓形變成不規(guī)則形;
2)通過(guò)與20ng/mL IFN-γ和10pg/mL LPS孵育,向M1巨噬細(xì)胞極化。


THP-1誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞:

 

1)同M1型第一步;
2)20ng/mL IL4和20ng/mL IL13孵育,向M2型巨噬細(xì)胞極化。


圖4 培養(yǎng)16或24h后IFN-γ/LPS對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞活力的影響

 

在大多數(shù)研究中IFN-γ的使用濃度為20ng/mL,但LPS的濃度在10ng/mL至1μg/mL之間,Marie Genin等人實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),隨著LPS濃度升高,對(duì)細(xì)胞的毒性明顯增加,為了減少LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性,Hirose及其同事使用10pg/mL的LPS+20ng/mL的INF-γ孵育巨噬細(xì)胞進(jìn)行M1極化18h。以上濃度僅供參考,老師們可以自己摸索一下條件。

 

巨噬細(xì)胞研究方法:

 

可以從全血或組織、腫瘤制成的單細(xì)胞懸液中分離巨噬細(xì)胞。也有商業(yè)化的產(chǎn)品如THP-1、RAW264.7細(xì)胞(小鼠白血病單核巨噬細(xì)胞)和J774A.1細(xì)胞(小鼠BALB/c單核巨噬細(xì)胞)等。分選方法包括磁珠分選、密度梯度分離和流式細(xì)胞儀,可以通過(guò)基因表達(dá)分析、功能研究、細(xì)胞因子和趨化因子生成的評(píng)估以及使用免疫熒光染色、流式細(xì)胞儀結(jié)合細(xì)胞表面標(biāo)志物來(lái)分析和表征巨噬細(xì)胞功能和表型。

 

Absin胞胞巴適本期推薦:



貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs972

胎牛血清(優(yōu)級(jí))

500mL

abs930

淋巴細(xì)胞分離液

200mL

abs9518

大小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液

100mL

abs9645

人單個(gè)核細(xì)胞分離液1.077

250mL

abs9244

青霉素-鏈霉素溶液(100×雙抗)

100mL

abs9468

RPMI 1640 培養(yǎng)基,ATCC 改良(含L-谷氨酰胺,含丙酮酸鈉,含HEPES)

500mL

abs9484

RPMI 1640培養(yǎng)基(含L-谷氨酰胺,不含HEPES)

500mL

abs9275

RPMI 1640培養(yǎng)基(含L-谷氨酰胺,不含HEPES,不含酚紅)

500mL

abs9107

佛波酯

5mg

abs47014848

脂多糖(O55:B5)

5mg

abs05291

Recombinant Human IFN-γ Protein

10ug

abs04698

Recombinant Human IL-4 Protein

10ug

abs00816

Recombinant Human IL-13 Protein

10ug

abs7033

細(xì)胞培養(yǎng)板(標(biāo)準(zhǔn)透明6孔板)

1箱






注:文中所用圖片來(lái)自網(wǎng)絡(luò),僅供學(xué)習(xí)參考用。

 


參考文獻(xiàn)


[1] 劉杰英. ADMA對(duì)單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞的影響及其對(duì)MCP-1及LOX-1表達(dá)的作用[D].山西醫(yī)科大學(xué),2010.
[2] Hirose K, Iwabuchi K, Shimada K, Kiyanagi T, Iwahara C, Nakayama H, et al.Different responses to oxidized low-density lipoproteins in human polarized  Lipids Health Dis. 2011;10:1.
[3] Genin M, Clement F, Fattaccioli A, Raes M, Michiels C. M1 and M2 macrophages derived from THP-1 cells differentially modulate the response of cancer cells to etoposide. BMC Cancer. 2015;15:577. Published 2015 Aug 8. doi:10.1186/s12885-015-1546-9.
[4] Yunna C, Mengru H, Lei W, Weidong C. Macrophage M1/M2 polarization. Eur J Pharmacol. 2020;877:173090. doi:10.1016/j.ejphar.2020.173090.
 

好消息!Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)!

 


Absin特色產(chǎn)品線:

WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

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