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工具篇 | mRNA標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用案例展示

閱讀:709      發(fā)布時(shí)間:2024-2-1
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背景介紹:

 

疫情mRNA疫苗的成功開發(fā)使得mRNA技術(shù)得到重要的關(guān)注。mRNA技術(shù)作為一種通用性技術(shù),其研發(fā)路徑和生產(chǎn)工藝顯著區(qū)別于傳統(tǒng)的生物醫(yī)藥研發(fā)模式,有望在傳染病疫苗、腫瘤疫苗、免疫治療、蛋白替代療法、治療性抗體等多個(gè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,是醫(yī)藥研發(fā)進(jìn)入新紀(jì)元。

 

在對于核酸藥物遞送系統(tǒng)研究、蛋白表達(dá)的療效研究以及mRNA藥物研發(fā)中工具mRNA起到非常重要作用,那么大家知道什么是工具mRNA,它的作用是什么呢?

 

什么是工具mRNA?

 

工具mRNA(mRNA標(biāo)準(zhǔn)品)即成品的標(biāo)準(zhǔn)型信使核糖核酸(類似于大家分子實(shí)驗(yàn)中常用的成品質(zhì)粒)。用戶購買后無需對mRNA標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行任何處理,可直接應(yīng)用于相應(yīng)實(shí)驗(yàn)。

 

愛必信擁有一系列的線性、環(huán)狀工具mRNA。其中線性mRNA采用化化學(xué)合成的Cap1帽結(jié)構(gòu),使線性mRNA具有高比例的天然帽子結(jié)構(gòu),修飾堿基 (N1-Methylpseudo-UTP、Pseudo-UTP、5-Methoxy-UTP、5-Methyl-CTP、N6-Methyl-ATP) 有5種可供選擇,同時(shí)使用優(yōu)化了適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的密碼子、UTR、polyA結(jié)構(gòu)。環(huán)狀mRNA通過體外轉(zhuǎn)錄生成并環(huán)化,繼而分離純化得到成品。

 

工具mRNA分類:

 

1、報(bào)告基因類

 

報(bào)告基因類mRNA常用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染、翻譯效率、藥物遞送、體內(nèi)成像等研究。其中愛必信EGFP mRNA是一種常用的示蹤蛋白mRNA,熒光穩(wěn)定性強(qiáng),用于表達(dá)加強(qiáng)的綠色熒光蛋白(分離自水母),發(fā)射波長為509nm,可通過熒光顯微鏡或者流式細(xì)胞術(shù)檢測,是觀察mRNA遞送、翻譯的理想工具。

 


貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs60176

EGFP mRNA

100ug

abs60178

Fluc mRNA

100ug

abs60180

mcherry mRNA

100ug

abs60192

EBFP mRNA

100ug

abs60332

Endless  eGFP mRNA

100ug

abs60333

Endless  Fluc  mRNA

100ug

abs60334

Endless  mcherry mRNA

100ug




圖 EGFP mRNA Agarose電泳條帶


圖 HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染EGFP mRNA 24h后表達(dá)效果

 

愛必信還擁有其他報(bào)告基因類工具mRNA如tdTomato mRNA、YFP mRNA、mBanana mRNA等熒光蛋白mRNA,可用于對照驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),大家如有需要?dú)g迎來詢。

 

2、基因編輯類

 

CRISPR/Cas9是*基因編輯系統(tǒng),被廣泛用于治療各類疾病。Cas9 mRNA可在細(xì)胞內(nèi)瞬時(shí)表達(dá)Cas9蛋白,能減少免疫反應(yīng)和脫靶風(fēng)險(xiǎn)。

 

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs60174

Cas9 mRNA

100ug

abs60191

Cre mRNA

100ug

abs60335

Endless  Cas 9 mRNA

100ug

 





3、免疫抗原類

 

免疫抗原類mRNA是腫瘤免疫療法的理想研究工具。卵白蛋白 (OVA) 是絲狀蛋白超家族的一員,是在蛋清中發(fā)現(xiàn)的主要糖蛋白。是一種常用的免疫和生化研究抗原,是一種已建立的氣道高反應(yīng)性模型過敏原,可激活細(xì)胞免疫和體液免疫。

 

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs60312

OVA mRNA

100ug

 




4、蛋白替代類

 

EPO mRNA用于表達(dá)人源EPO蛋白 (human erythropoietin) 。我們使用 (Abs CapTM) 在體外轉(zhuǎn)錄生產(chǎn)了EPO mRNA,化學(xué)合成的Cap1結(jié)構(gòu)使其具有高比例的天然的mRNA帽子結(jié)構(gòu),從而獲得高效的表達(dá)效果。

 


貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs60194

EPO mRNA

100ug

abs60336

Endless  EPO mRNA

100ug




 

工具mRNA產(chǎn)品特征:

 


濃度

1mg/mL

狀態(tài)

溶劑,1mM Sodium Citrate,pH 6.4

儲(chǔ)存溫度

建議分裝,低于-40℃保存,避免反復(fù)凍融

效期

建議在2個(gè)月內(nèi)使用完





工具mRNA產(chǎn)品優(yōu)勢:

 

1、Cap1型帽結(jié)構(gòu),提高mRNA穩(wěn)定性及翻譯效率,更適合哺乳動(dòng)物;
2、5種修飾可供選擇,加入修飾堿基可提高翻譯效率,降低免疫原性;
3、合適的PolyA尾結(jié)構(gòu),保證mRNA穩(wěn)定性和翻譯效率;
4、完整性高,質(zhì)控嚴(yán)格,方便研究和應(yīng)用。

 

用戶實(shí)驗(yàn)案例1:

 

用核酸轉(zhuǎn)染試劑盒(abs60259)轉(zhuǎn)染mCherry mRNA至HEK293細(xì)胞24h、48h,在熒光顯微鏡下觀察到的紅色熒光穩(wěn)定且信號強(qiáng)。(具體實(shí)驗(yàn)操作可參考核酸轉(zhuǎn)染試劑盒(abs60259)實(shí)驗(yàn)操作步驟)


圖 轉(zhuǎn)染mCherry mRNA 24h后的熒光


圖 轉(zhuǎn)染mCherry mRNA 48h后的熒光

 

用戶實(shí)驗(yàn)案例2

 

用mRNA轉(zhuǎn)染試劑(abs60339)在不同類型細(xì)胞中轉(zhuǎn)染線性工具mRNA—EGFP mRNA,處理細(xì)胞24h后利用熒光顯微鏡拍照,各種細(xì)胞都呈現(xiàn)較強(qiáng)的綠色熒光。


圖 轉(zhuǎn)染EGFP mRNA于不同類型細(xì)胞中

 

用戶實(shí)驗(yàn)案例3

 

注射線性Luciferase mRNA至活體小鼠體內(nèi),小鼠體重150ug,每針注射20uL,共計(jì)3針,3天后進(jìn)行活體成像。


圖 Luciferase mRNA注射小鼠后活體成像

 

FAQ:

 

1、工具mRNA保存條件是什么?

A:需要低于-40°C保存,-80℃冰箱或液氮保存都可以,愛必信所提供的均為新鮮生產(chǎn)的產(chǎn)品,為了達(dá)到最佳使用效果,請?jiān)谑盏截浳锏?個(gè)月內(nèi)使用。若不小心將mRNA短期(例如1天)存放于-20℃,可以在正式實(shí)驗(yàn)之前將mRNA跑瓊脂糖凝膠電泳看其是否降解。

 

2、工具mRNA是什么狀態(tài)?

A:我司的工具mRNA是液體狀態(tài),通用溶劑一般是1mM檸檬酸鈉鹽溶液,pH為6.4。

 

3、工具mRNA的貨期有多久?

A:我公司工具mRNA均為新鮮生產(chǎn)產(chǎn)品,我們收到訂單后會(huì)立即安排生產(chǎn)、發(fā)貨。一般貨期為1-2周。

 

4、工具mRNA的純度能達(dá)到多少?

A:線性mRNA可達(dá)到90%的純度;環(huán)狀mRNA如果長度是3-5k,可達(dá)到科研級別純度,通常能達(dá)到85%的純度。環(huán)狀mRNA序列越長,關(guān)環(huán)效率越低,純化難度越高。

 

5、工具mRNA推薦的帽結(jié)構(gòu)是哪一種?

A:Cap1 AG。加帽率高達(dá)95%。

 

6、我所需要的工具mRNA在沒有找到,怎么辦?

A:目前市面上常規(guī)的mRNA標(biāo)注品類目我公司都是有的。若我司的工具mRNA類別中沒有您所需的mRNA,您可以選擇我公司的定制合成服務(wù),我們?yōu)槟O(shè)計(jì)合成特定的mRNA。

 

其他相關(guān)產(chǎn)品推薦


貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs60259

核酸轉(zhuǎn)染試劑盒

1.5mL

abs60339

mRNA轉(zhuǎn)染試劑

1mL

abs7119

1.5mL離心管(無菌無酶)

10盒/箱

abs7075

200uL吸頭(盒裝,無菌無酶)

100盒/箱





 


Absin特色產(chǎn)品線:

WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

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