在生物學實驗中，二抗的選擇至關重要。其中，HRP酶標二抗和熒光二抗是兩種常見的二抗類型，它們各具特色，并在不同的實驗場景下發(fā)揮著關鍵作用。
一、HRP酶標二抗
1. 定義及特性
HRP酶標二抗，即辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)標記的二抗，是生物學實驗常規(guī)用的二抗。其特點包括比活性高、穩(wěn)定性好、分子量小、純酶容易制備等，因此在免疫學實驗中廣泛應用。
2. 應用場景
HRP酶標二抗常用于如免疫印跡(WB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)以及免疫組織化學(IHC)等實驗。在這些實驗中，HRP標記的二抗與底物反應，產(chǎn)生可檢測的化學發(fā)光信號，從而實現(xiàn)目標蛋白的檢測。例如，在WB實驗中，HRP酶標二抗能夠檢測樣品中的特定蛋白，并通過ECL試劑顯色，使信號可視化。
HRP在不同實驗中對應的底物及檢測原理和方法
實驗 | 底物 | 檢測原理和方法 |
WB | Luminol和H2O2 | 魯米諾在堿性條件下與過氧化氫（H2O2）反應，在辣根過氧化物酶（HRP）的催化下產(chǎn)生化學發(fā)光信號，可用CCD凝膠成像儀進行檢測。 |
Elisa | TMB | 在HRP的作用下，TMB被氧化并產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，隨后在強酸條件下變?yōu)辄S色。使用酶標儀在450nm波長下進行檢測。 |
HIC | DAB | DAB常用于組織化學和免疫組化實驗，與HRP反應后形成不溶性棕色沉淀物，可以使用光學顯微鏡檢測。 |
二、熒光二抗
1. 定義及特性
熒光二抗，即帶有熒光基團的二抗，能夠在激發(fā)光下發(fā)出熒光信號。常用的熒光基團包括Cy3、Cy5、Alexa Fluor等。這些熒光基團具有不同的激發(fā)和發(fā)射波長，可以實現(xiàn)多標染色實驗中的不同顏色標記。
2. 應用場景
熒光二抗廣泛應用于免疫熒光（IF）、免疫細胞化學（ICC）以及流式細胞儀（Flow cytometry）等實驗。在這些實驗中，熒光二抗與目標蛋白結合后，通過熒光顯微鏡或流式細胞儀等設備檢測熒光信號，從而實現(xiàn)目標蛋白的定位和定量。例如，在IF實驗中，熒光二抗可以標記細胞內(nèi)的特定蛋白，并通過熒光顯微鏡觀察其在細胞內(nèi)的分布和表達情況。
3. 多標染色實驗
熒光二抗在多標染色實驗中具有特殊優(yōu)勢。通過選擇不同激發(fā)和發(fā)射波長的熒光基團，可以實現(xiàn)多種目標蛋白的同時檢測。例如，可以使用Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 594兩種熒光基團分別標記兩種不同的目標蛋白，并通過熒光顯微鏡同時觀察它們在細胞內(nèi)的分布和表達情況。
三、酶標二抗和熒光二抗的對比
HRP酶標二抗和熒光二抗各具特色，分別在不同的實驗場景下發(fā)揮關鍵作用。HRP酶標二抗以其高靈敏度和穩(wěn)定性在WB、ELISA和IHC等實驗中廣泛應用；而熒光二抗則以其特殊的熒光信號和多標染色能力在IF、ICC和流式細胞儀等實驗中展現(xiàn)出特殊優(yōu)勢。在實驗中，應根據(jù)具體需求和實驗條件選擇合適的二抗類型，以提高實驗的準確性和可靠性。
| HRP酶標二抗 | 熒光二抗 |
定義 | 辣根過氧化物酶（HRP）標記的二抗 | 帶有熒光基團的二抗 |
特性 | 催化底物產(chǎn)生化學發(fā)光信號 | 在激發(fā)光下發(fā)出熒光信號 |
應用場景 | 免疫印跡（WB）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫組織化學（IHC）等 | 免疫熒光（IF）、免疫細胞化學（ICC）、流式細胞儀（Flow cytometry）等 |
靈敏度 | 高，可挑戰(zhàn)fg級別 | 中等至高，取決于熒光基團和檢測設備 |
多標染色 | 不適用于多標染色 | 適用于多標染色，可同時檢測多種目標蛋白 |
信號穩(wěn)定性 | 相對穩(wěn)定，不易受外界因素影響 | 對光敏感，需避免長時間暴露于強光下 |
可視化方法 | 化學發(fā)光成像（如ECL試劑顯色） | 熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測 |
操作簡便性 | 操作相對簡單，但可能涉及化學發(fā)光底物的處理 | 操作簡便，直接通過熒光顯微鏡或流式細胞儀觀察 |
成本 | 相對較低（基于常規(guī)生化試劑） | 可能較高，尤其是高級熒光顯微鏡和流式細胞儀的使用 |
優(yōu)點 | 高靈敏度、穩(wěn)定性好、成本相對較低 | 多標染色能力強、可視化效果好、操作簡便 |
缺點 | 不適用于多標染色、對底物量有一定要求 | 對光敏感、成本可能較高 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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