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發(fā)酵罐在滅菌的時(shí)候需要注意什么

 

發(fā)酵罐操作與滅菌技術(shù)   常用的滅菌技術(shù)一般分為；物理滅菌和化學(xué)滅菌。物理滅菌又包括濕熱滅菌、干熱滅菌、射線滅菌法和過濾滅菌等。而化學(xué)滅菌主要是使用化學(xué)試劑（如甲醛、苯酚、新潔爾滅、過氧乙酸、高錳酸鉀等）進(jìn)行某些容器或物料以及無菌區(qū)域的滅菌。在生物發(fā)酵方面，常用的設(shè)備是機(jī)械攪拌式發(fā)酵，其殺菌效果的好壞直接影響到發(fā)酵是否能正常進(jìn)行。由于工業(yè)操作的特點(diǎn)，發(fā)酵罐滅 菌普遍采用濕熱滅菌法。  一．小型發(fā)酵罐操作和酵母菌培養(yǎng)  實(shí)驗(yàn)室所使用的小型通氣攪拌發(fā)酵罐具有體積小，耗電少，不宜染菌，單位時(shí)間、單位體積的生產(chǎn)力高，代謝放出熱量易于移去，操作控制和維修方便等特點(diǎn)，因此能較好的滿足微生物的生長(zhǎng)和代謝的需要。 1.設(shè)備和材料  1L發(fā)酵罐、5L發(fā)酵罐、50L發(fā)酵罐、一套空氣除菌系統(tǒng)、供檢查無菌用的肉湯培養(yǎng)基和裝置。 2.發(fā)酵罐操作步驟 2.1發(fā)酵罐的清洗  發(fā)酵罐使用前后都應(yīng)認(rèn)真清洗，特別是前后兩次培養(yǎng)采用不同的菌株時(shí)，更應(yīng)注意清洗和殺菌工作。  發(fā)酵罐內(nèi)可進(jìn)行清洗的任何部分都應(yīng)認(rèn)真清洗，否則都可能成為雜菌的滋生地。易被忽略而不能充分清洗的地方有噴嘴角內(nèi)部與取樣管內(nèi)以及罐頂?shù)忍帯?2.2 種子培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件  蛋白胨10g，葡萄糖40g，蒸餾水100ml，pH自然。500ml三角瓶裝液量100ml，115℃，滅菌20min。  培養(yǎng)條件：用接種環(huán)從保存斜面中接一環(huán)至三角瓶中，150r/min，28℃，搖瓶培養(yǎng)48h。  2.3 發(fā)酵罐的組裝工作  ① 連接好冷卻水管。若采用自來水冷卻，連接部要充分牢固，并且注意連接管管徑與自來水管管徑一致，盡可能采用耐壓管。  ②由于通入的空氣有一定壓力，應(yīng)注意連接壓縮空氣的管子應(yīng)能承受一定壓力。 

 

③安裝pH及溶解氧等檢測(cè)裝置，注意各接線口不要出現(xiàn)差錯(cuò)。由于操作過程要和水打交道，故線路連接一定要注意安全，要特別注意防止漏電。 2.4 發(fā)酵罐滅菌  ① 排氣管為玻璃管，內(nèi)裝有棉花，以保證蒸汽能自由出入發(fā)酵罐，同時(shí)不會(huì)出現(xiàn)染菌現(xiàn)象。  ② 取樣口上連接一段硅膠管，在硅膠管上安裝節(jié)流夾，以防止培養(yǎng)基在滅菌是流出。  ③ 裝入發(fā)酵罐溶積60%的培養(yǎng)基（成分同種子培養(yǎng)基）后，將發(fā)酵罐放入滅菌釜內(nèi)，在115℃下，滅菌20min。當(dāng)滅菌完成后，溫度降到60℃以下時(shí)，打開滅菌釜，確認(rèn)發(fā)酵罐上所連接的管路完好后，將罐去除。盡快將通氣管接好，確認(rèn)排氣口正常后，以0.3-0.5L/min通入空氣。接通冷卻水管路，開攪拌在低速下進(jìn)行培養(yǎng)基的冷卻。 2.5   取樣與分析方法  自培養(yǎng)操作開始起，每3h取一次樣。取樣時(shí)，將取樣管口流出的初15ml左右培養(yǎng)液作為廢液，取隨后流出的培養(yǎng)液10ml，在OD505下測(cè)定吸光度。所得數(shù)值基于已制得的菌體量與吸光度之間的曲線，換算出菌體濃度。 二  發(fā)酵菌的空消技術(shù)  1 發(fā)酵罐的清洗  打開罐底排污閥，用冷水沖洗罐壁，如壁內(nèi)壁有沉積物，操作人員必須下罐進(jìn)行人工鏟除，否則易包藏雜菌成為污染源。進(jìn)罐清洗必須兩人進(jìn)行，一人進(jìn)罐清洗，一人在外監(jiān)護(hù)。同時(shí)與罐體相連的取樣管道，進(jìn)料管道，排污管道及有關(guān)閥門都要通水沖洗干凈，通以沸水，以提高洗滌效率，洗完后蓋上入孔蓋。  ① 發(fā)酵罐空消操作  ② 打開罐頂各排汽閥，開三路進(jìn)汽（罐底、風(fēng)管、取樣管）。  ③ 開始時(shí)，蒸汽以下進(jìn)上出為主，蒸汽由罐底和風(fēng)管進(jìn)入，由罐頂所有排汽閥排出冷空氣。在蒸汽排出時(shí)，即關(guān)閉各閥門，稍開排汽閥，當(dāng)罐壓上升到1.5-2.5kgf/cm2(1kgf/cm2=98.0665kpa)時(shí)，開罐頂各排汽閥，排汽歷時(shí) 15-20min，蒸汽改為上進(jìn)下出為主，即關(guān)閉底部蒸汽閥，關(guān)小進(jìn)風(fēng)管汽閥，蒸汽主要從取樣管進(jìn)，連消進(jìn)料管進(jìn)入，空消過程中蒸汽應(yīng)將兩只大罐間倒種管道、壓料進(jìn)風(fēng)管道、接種管道以及各排汽閥打開，排汽消毒（兩個(gè)沖視鏡閥開啟短暫時(shí)間即可）。