目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>克隆感受態(tài)細(xì)胞 非電擊>> GT115Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
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更新時(shí)間：2024-03-21 15:19:16瀏覽次數(shù)：376評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50支100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | ABG026-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 細(xì)胞培養(yǎng) |
GT115 Chemically Competent Cell
基因型：
F- mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1rpsL (StrR) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD
簡(jiǎn)要說(shuō)明：
GT115菌株，是專門用來(lái)克隆含有發(fā)夾結(jié)構(gòu)（Hairpin）或重復(fù)序列等DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的基因序列的大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種SbcCD蛋白復(fù)合體，可以識(shí)別DNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并將其切除；將sbcC和sbcD兩個(gè)基因突變，增強(qiáng)了發(fā)夾結(jié)構(gòu)DNA的穩(wěn)定性。同時(shí)在大腸桿菌基因組中引入uidA(DMluI)::pir-116，使GT115可以表達(dá) 兀 蛋白，含有R6Kgori復(fù)制子的質(zhì)粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常復(fù)制。rpsL賦予GT115lian霉素抗性，同時(shí)該菌株還含有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recA)突變，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性。GT115感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×108 cfu/μg DNA。
操作說(shuō)明：
1. 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物） 并用手bo打 EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25 分鐘。
2. 42℃水浴熱激 45秒，迅速放回冰上并靜置 2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌SOC 或LB培養(yǎng)基，混勻后 37℃，200 rpm復(fù)蘇 60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取 100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng) 6.5 小時(shí)以上
注意事項(xiàng)：
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入目的 DNA 時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
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