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使用細(xì)胞株有哪些細(xì)節(jié)要注意
細(xì)胞株是科研工作中至關(guān)重要的工具，其正確使用對于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性具有關(guān)鍵意義。
細(xì)胞株的選擇是首要環(huán)節(jié)。要根據(jù)研究目的來挑選合適的細(xì)胞株。不同的細(xì)胞株具有不同的生物學(xué)特性，如腫瘤細(xì)胞株、正常細(xì)胞株、干細(xì)胞株等。如果是研究腫瘤發(fā)病機(jī)制，可能會選擇特定的腫瘤細(xì)胞株，如肺癌細(xì)胞株 A549、結(jié)直腸癌細(xì)胞株 SW620 等。這些細(xì)胞株應(yīng)具備明確的來源、背景信息和已驗(yàn)證的生物學(xué)特性，可通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)或咨詢專業(yè)的細(xì)胞庫獲取詳細(xì)信息。
細(xì)胞的復(fù)蘇是使用細(xì)胞株的重要起始步驟。從液氮罐中取出細(xì)胞凍存管后，要迅速放入 37℃的水浴中，不斷搖晃，確保凍存液快速融化。這個(gè)過程要控制在 1 - 2 分鐘內(nèi)，以減少室溫下融解過程對細(xì)胞的損傷。融化后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中，輕輕吹打均勻，然后進(jìn)行離心，去除凍存液中的 DMSO 等有害物質(zhì)。
培養(yǎng)條件的優(yōu)化對于細(xì)胞株的生長至關(guān)重要。溫度通常維持在 37℃，二氧化碳濃度保持在 5%左右，這是大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞所需的環(huán)境條件。培養(yǎng)基的選擇也要根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)來確定，不同的細(xì)胞株對營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子等的需求有所差異。例如，一些癌細(xì)胞株可能需要添加血清、胰島素、谷氨酰胺等特殊成分。
細(xì)胞的傳代也有一定技巧。當(dāng)細(xì)胞長到 80% - 90%匯合度時(shí)，需要進(jìn)行傳代。首先棄去舊的培養(yǎng)基，用 PBS 清洗細(xì)胞以去除殘留的血清和雜質(zhì)。然后加入胰酶消化液，消化時(shí)間和溫度要嚴(yán)格控制，避免過度消化損傷細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞變圓、彼此分離時(shí)，加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細(xì)胞脫壁，按照適當(dāng)?shù)谋壤臃N到新的培養(yǎng)皿中。
細(xì)胞的凍存同樣不可忽視。當(dāng)細(xì)胞處于對數(shù)生長期時(shí)，可以進(jìn)行凍存。凍存液一般由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清和 DMSO 按一定比例混合而成。將細(xì)胞與凍存液充分混合后，分裝到凍存管中，做好標(biāo)記，包括細(xì)胞名稱、傳代次數(shù)、凍存日期等信息。然后將凍存管逐步降溫，先放入 4℃冰箱冷藏一段時(shí)間，再轉(zhuǎn)移到 - 80℃超低溫冰箱短期保存或液氮罐中長期保存。
在整個(gè)細(xì)胞株的使用過程中，嚴(yán)格的無菌操作是必須遵循的原則。使用前要對操作臺面、器械等進(jìn)行消毒，操作過程中要注意防止微生物污染。同時(shí)，要定期對細(xì)胞進(jìn)行檢查，觀察其形態(tài)、生長狀態(tài)等，確保細(xì)胞株沒有發(fā)生變異或被污染。只有這樣，才能充分發(fā)揮細(xì)胞株在科研中的作用，獲得可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。