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3T3-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

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更新時(shí)間:2024/07/28 11:36:51瀏覽次數(shù):993

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供貨周期 現(xiàn)貨
3T3-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
該細(xì)胞公司*,培養(yǎng)狀態(tài)下的,現(xiàn)貨一周供應(yīng),我公司可100%保障該細(xì)胞的質(zhì)量,代數(shù)年輕活性好,不含有細(xì)菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體 。

詳細(xì)介紹

3T3-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

生長(zhǎng)狀態(tài):良好
  
運(yùn)輸方式:順豐速遞
器官來源:人或動(dòng)物
細(xì)胞形態(tài):正常
免疫類型:詳詢
物種來源:人或動(dòng)物
相關(guān)疾?。?/td>詳詢
組織來源:人或動(dòng)物器官
品系:見說明書
細(xì)胞類型:科研
數(shù)量:大量
規(guī)格:T25

3T3-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
準(zhǔn)備培養(yǎng)基;北美胎牛血清,10%;雙抗1%。
培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
1. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
2. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例;
1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng):1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)(4h左右),穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。
3. 靜置后鏡檢,拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
4. 貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。
5. 細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4℃保存?zhèn)溆茫裳a(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,一半用客戶自備的培養(yǎng)基,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。
6. 細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制,
7. 因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過程外因太多,所以我們的售后保障期為一周,超過一周的細(xì)胞我們會(huì)酌情處理,但不提供免費(fèi)更換服務(wù)。
細(xì)胞運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:

(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;

(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
 

 

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