GC-1 spg小鼠精原細(xì)胞系

細(xì)胞英文(簡稱）:GC-1 spg 
細(xì)胞來源:   ATCC  DSMZ   JCM   ECACC
代次:P3
規(guī)格:T25
細(xì)胞數(shù):1x10^⁶ cells
組織來源:精原
細(xì)胞形態(tài):貼壁
細(xì)胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細(xì)胞檢測:細(xì)胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次?
凍存條件:*培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO
傳代細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟
1、        37度水浴加熱所有試劑。
2、        吸取培養(yǎng)培養(yǎng)皿內(nèi)舊培養(yǎng)液，放置一個干凈離心管內(nèi)。（為稍后終止消化作準(zhǔn)備。）
3、        用PBS清洗培養(yǎng)皿，棄去。
4、        向瓶內(nèi)加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。（一般一個大皿1ml）
5、        2-5分鐘后，輕輕震蕩培養(yǎng)皿。使細(xì)胞系從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。顯微鏡下觀察若細(xì)胞由貼壁變?yōu)閼腋【图尤胙澹丛囵B(yǎng)液）終止消化。
6、        收集細(xì)胞懸液，880轉(zhuǎn)/分、5分鐘離心，棄去上清液。
7、        加培養(yǎng)液至1ml，混勻后取10ul計數(shù)細(xì)胞。
8、        根據(jù)實驗要求取適量細(xì)胞留種或接種于新的培養(yǎng)皿或96孔板、24孔板中，再加入相應(yīng)體積的培養(yǎng)液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、        接種好的培養(yǎng)皿順時針和逆時針各轉(zhuǎn)三圈，使細(xì)胞排列均勻。
10、        放入暖箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

GC-1 spg小鼠精原細(xì)胞系

 操作步驟：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。     
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
    1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 注意事項：

1.動作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因。
3.有時間的話，需要細(xì)胞計數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，細(xì)胞房的實驗穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗。
4.個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。
5.細(xì)胞房不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。