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H1666人肺支氣管癌細胞

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更新時間:2024/07/28 15:42:42瀏覽次數(shù):698

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供貨周期 現(xiàn)貨
H1666人肺支氣管癌細胞
該細胞公司*,培養(yǎng)狀態(tài)下的,現(xiàn)貨一周供應(yīng),我公司可100%保障該細胞的質(zhì)量,代數(shù)年輕活性好,不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體 。

詳細介紹

H1666人肺支氣管癌細胞

 

 操作步驟:

1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。

 2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。      
     1. 
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
     2.  1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。     
     3. 
 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
     4. 將細胞懸液按 1比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
    1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

H1666人肺支氣管癌細胞

注意事項:

1.動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因。
3.有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措。
3.要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,細胞房的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗。
4.個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,zui近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟。
5.細胞房不能進去太多人,避免相互干擾。

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