天然AAV1-AAV9、AAVrh10、AAVDJ衣殼（1E+09-1E+10衣殼）和變性AAV5衣殼（1E+09-1E+10衣帽，在樣品緩沖液中于95°C變性10分鐘）的斑點(diǎn)印跡分析。

在室溫下，用PBST（PBS+0.1%吐溫20）中的5%干乳將硝化纖維膜封閉1小時(shí)。將抗AAV5（完整顆粒）小鼠單克隆抗體ADK5a在封閉緩沖液（抗體濃度100 ng/ml）中稀釋，并在室溫下孵育1小時(shí)。第二抗體山羊抗小鼠IgG-HRP也在封閉緩沖區(qū)（抗體濃度200 ng/ml）中溶解，并在RT下孵育一小時(shí)。使用PierceTM ECL Western Blotting Substrate通過化學(xué)發(fā)光檢測可見條帶。

用于表征感染的不同階段，對(duì)AAV5組裝過程的分析非常有用。ADK5a與完整的腺相關(guān)病毒5顆粒、空衣殼和完整衣殼特異性反應(yīng)。識(shí)別組裝衣殼的構(gòu)象表位，不存在于變性衣殼蛋白和天然但未組裝的衣殼蛋白中。該抗體不能用于免疫印跡。該抗體可用于中和實(shí)驗(yàn)。

作為PROGEN在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦PROGEN熱銷產(chǎn)品抗AAV-5、ADK 5a、小鼠單克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

抗AAV-5、ADK 5a、小鼠單克隆抗體：

數(shù)量10 微克

抗體類型 單克隆

宿主 小鼠

亞型 IgG2a kappa

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

應(yīng)用 親和色譜、斑點(diǎn)印跡、ELISA、ICC/IF、IP、中和試驗(yàn)

純化 親和色譜

反應(yīng)性 AAV5

無反應(yīng)性 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV11, AAV12, AAVDJ, AAVrh10, AAVrh74

重懸前儲(chǔ)存 直至標(biāo)示的有效期前，儲(chǔ)存于2-8°C

重懸后儲(chǔ)存 可在2-8°C下儲(chǔ)存長達(dá)3個(gè)月；長期儲(chǔ)存需分裝于-20°C；避免凍融循環(huán)

用途 僅供研究使用

克隆號(hào) ADK5a

免疫原 AAV5衣殼

濃度 用200微升PBS重懸后濃度為50微克/毫升

配方 凍干；用200微升無菌PBS重懸

結(jié)合親和力

KD值（AAV5）= 4.9E-11 M

同義詞腺相關(guān)病毒5，AAV-5

同種型：IgG2aκ

測試應(yīng)用測試稀釋度

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）/ 免疫熒光（IF） 1:20

親和色譜 依據(jù)檢測而定

斑點(diǎn)印跡 1:500 (0.1 微克/毫升；非變性條件)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 依據(jù)檢測而定

免疫沉淀（IP） 1:5

中和試驗(yàn)EC50 ~7 微克/毫升（AAV5） - 依據(jù)檢測而定

抗AAV-5、ADK 5a、小鼠單克隆抗體特點(diǎn)：

純化、凍干

小鼠單克隆抗體

適用于斑點(diǎn)印跡、ELISA和中和測定

與AAV5完整衣殼反應(yīng)

文獻(xiàn)參考：

Ohba K. et al. Adeno-associated virus vector system controlling capsid expression improves viral quantity and quality., iScience, 26, 106487, (2023).

Emmanuel, S. N., Mietzsch, M., Tseng, Y. S., Smith, J. K. & Agbandje-Mckenna, M. Parvovirus Capsid-Antibody Complex Structures Reveal Conservation of Antigenic Epitopes across the Family. Viral Immunol. 34, 3–17 (2021).

Baatartsogt, N. et al. A sensitive and reproducible cell-based assay via secNanoLuc to detect neutralizing antibody against adeno-associated virus vector capsid. Mol. Ther. - Methods Clin. Dev. 22, 162–171 (2021).

Silveria, M. A., Large, E. E., Zane, G. M., White, T. A. & Chapman, M. S. The structure of an aav5-aavr complex at 2.5 ? resolution: Implications for cellular entry and immune neutralization of aav gene therapy vectors. Viruses 12, (2020).

PROGEN公司成立于1983年，總部位于德國海德堡，由海德堡大學(xué)教授聯(lián)合創(chuàng)辦，體外診斷試劑的制造商和供應(yīng)商，也是德國癌癥研究中心的合作伙伴。 主要產(chǎn)品線： 經(jīng)過質(zhì)檢驗(yàn)證的抗體、體外診斷產(chǎn)品、抗體噬菌體展示技術(shù)、密度梯度分離液和AAV(腺相關(guān)病毒）檢測試劑盒等。

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