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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：溶藻弧菌核酸檢測試劑盒48T 0.2PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-02R6592
產(chǎn)品規(guī)格：48T 0.2PCR管
產(chǎn)品分類：水產(chǎn)養(yǎng)殖病害檢測系列）
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
M-CSF/FITC 熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
TIF1 Alpha/TRIM24/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ACPL2 性磷樣蛋白2抗體 0.2ml
Rabbit Bov IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗IgG 0.1ml
Gemin 7 脊髓性肌癥蛋白Gemin7抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Bov IgG 兔抗IgG 1mg
TIF1 Alpha/TRIM24/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
FE(Human ferritin) ELISA Kit 人鐵蛋白Multi-class antibodies： 48T
HMGA1 高遷移率族蛋白A1抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh MCSF/M-CSF 巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體 0.1ml
TrxR(Human thioredoxin reductase) ELISA Kit 人硫氧還蛋白還原 96T
RCAS1 相關(guān)表面抗原RCAS1抗體 0.2ml
C1orf141 1號染色體開放閱讀框141抗體 0.2ml
HMGA1 高遷移率族蛋白A1抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit horse IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.1ml
phospho-GAP43 (Ser41) 磷化神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh AKT3 蛋白激B3 0.1ml
LEF-1/FITC 熒光標(biāo)記增強(qiáng)因子-1抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 0.1ml
Snake poison Protein/FITC 熒光標(biāo)記抗蛇毒蛋白抗體(蝮蛇)IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
溶藻弧菌核酸檢測試劑盒48T 0.2PCR管大鼠轉(zhuǎn)化生長因子受體β（TGF-βR）elisa檢測試劑盒
大鼠血管性血友病因子（VWF）elisa檢測試劑盒
大鼠X-連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）elisa檢測試劑盒
大鼠11-β-羥基類固醇脫氫1（HSD11β1）elisa檢測試劑盒
大鼠β淀粉樣蛋白42（Aβ42）elisa檢測試劑盒
大鼠凋亡相關(guān)因子配體（FASL）elisa檢測試劑盒
大鼠鈣衛(wèi)蛋白（CALPRO）elisa檢測試劑盒
大鼠膜聯(lián)蛋白A5（ANXA5）elisa檢測試劑盒
大鼠抗復(fù)合物（TAT）elisa檢測試劑盒
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3（TGF-β3）elisa檢測試劑盒
大鼠Apelin蛋白（APLN）elisa檢測試劑盒
大鼠叉頭框蛋白P3（FOXP3）elisa檢測試劑盒
大鼠脂肪結(jié)合蛋白1（FABP1）elisa檢測試劑盒
大鼠硫氧還蛋白還原1（TrxR1）elisa檢測試劑盒
大鼠谷氨酰轉(zhuǎn)移（TG）elisa檢測試劑盒
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