限度利用2個不同分離系統(tǒng)，實現(xiàn)全2維分離

全二維液相色譜將兩種獨立的分離系統(tǒng)加以結(jié)合，可大幅度地提高分離性能，是全新的分析方法。通過多個分離系統(tǒng)的組合，可以分離使用一維LC難以分離的成分，為此，可應(yīng)用于復(fù)雜樣品的分析。另外，與一般的二維LC不同，獲取的數(shù)據(jù)反映出第1維與第2維雙方的分離結(jié)果，可限度地應(yīng)用雙方的分離系統(tǒng)。

 

復(fù)雜樣品分離不充分，造成峰重合

將一維分離的成分進一步以第2根色譜柱進行分離， 即使復(fù)雜的樣品也可實現(xiàn)高分離

通常的1維LC與Comprehensive 2D-LC的差異

 

全二維液相色譜將一維系統(tǒng)的洗脫液在二維譜圖上進一步細致地分割解析，在線連續(xù)地在二維系統(tǒng)實施分離。通過2個環(huán)路的閥構(gòu)成一維與二維系統(tǒng)相交的流路結(jié)構(gòu)，切換閥使這些環(huán)路交替地重復(fù)進行一維洗脫液分割和向二維系統(tǒng)注入的動作。

全二維液相色譜系統(tǒng)的流路與動作

在二維譜圖上解析各成分

全二維液相色譜分析的優(yōu)點不僅僅是高分離。在二維譜圖上，維軸與第二維軸可分別為不同的分離條件，因此，各成分的物性與圖上的位置相關(guān)。在二維譜圖上進行解析，可對具有類似結(jié)構(gòu)的化合物分組，可直接觀察到各成分群，或在圖上解析未知成分的性質(zhì)。

 磷脂39成分的同時分析
PG：磷脂　PE：磷脂酰乙醇胺  PA：磷脂酸
PI：磷脂酰肌醇  PS：磷脂?！C：磷脂酰

磷脂各成分通過第1維正相系統(tǒng)基于極性基團種類進行分離，通過第2維反相系統(tǒng)基于脂肪酸鏈長進行分離。

上圖按種類分組表示各成分。

磷脂有以正離子模式較強檢出的成分和以負離子模式較強檢出的成分，但利用LCMS-8050的高速正負離子切換［UFswitching］檢測，可以在1次分析中獲得兩組數(shù)據(jù)。

由擁有性能的Nexera X2構(gòu)筑

為實現(xiàn)全二維液相色譜，要求各構(gòu)成組件具有性能。比如，二維分析系統(tǒng)滿足超快速梯度分析，即高流量且超高壓的送液要求。并且，為了解析樣品間的差異，還要求在上述分析條件下具有非常高的保留時間重現(xiàn)性。 Nexera-e采用具有水平的Nexera X2的各組件，具備充分滿足上述嚴苛要求的性能。比如，送液單元LC-30AD可至3 mL/min的高流量區(qū)域，并以130 MPa耐壓實施送液。與同樣可耐壓130 MPa的高壓流路切換閥FCV-32AH組合，擴大了二維分析系統(tǒng)的選擇范圍。

Nexera-e 系統(tǒng)（PDA型號）

Nexera-e采用本公司自行開發(fā)的低容量流路切換閥。

全二維液相色譜需要頻繁的切換流路，因此，如果閥的密封因磨損易產(chǎn)生粉末，則可能在分析中造成流路堵塞等，有可能對分析產(chǎn)生重大影響。流路切換閥FCV-32AH采用了在開發(fā)Nexera X2的自動進樣器過程中培育優(yōu)異技術(shù)，排除了這種擔心。

對于基本上以超快速分析為主的全二維液相色譜來說，檢測器的高速采樣也非常重要。

Nexera X2的光電二極管陣列檢測器SPD-M30A達200 Hz，三重四極桿型質(zhì)譜儀LCMS-8050也通過采用UFMS技術(shù)而實現(xiàn)了超高速掃描，可從容地采集數(shù)據(jù)。

編號	成分	二維保留時間重現(xiàn)性 ［%RSD］
1	Acetanilide	0.43
2	Methyl paraben	0.37
3	Acetophenone	0.66
4	Propyl paraben	0.43
5	Butyrophenone	0.42
6	Benzophenone	0.35
7	Hexanophenone	0.43

標準品分析中各成分的保留時間重現(xiàn)性（n=6）
（1: Acetanilide, 2: Methyl paraben, 3: Acetophenone, 4: Propyl paraben, 5: Butyrophenone, 6: Benzophenone, 7: Hexanophenone)

二維數(shù)據(jù)變換與二維數(shù)據(jù)上的定性?定量解析

數(shù)據(jù)采集所獲得的數(shù)據(jù)通過全二維液相色譜解析軟件ChromSquare變換為二維等高線數(shù)據(jù)。色譜圖上的峰在等高線數(shù)據(jù)上被識別為點，以這個點為單位進行定性·定量解析處理。

磷脂標準樣品的LC×LC/MS數(shù)據(jù)解析
（左上：等高線圖（放大），左下：MS譜圖，右上：第2維的色譜圖，右下：等高線圖（整體）） 

隨著指針的移動，顯示表示MS譜圖。比如，可以對有特征的點簡便地使用MS譜圖進行定性分析。

與通常的HPLC分析相同，可根據(jù)標準樣品的分析結(jié)果制作標準曲線，根據(jù)此標準曲線進行未知樣品的定量分析。

※ChromSquare為意大利Chromaleont S.r.l的產(chǎn)品。