FITC葡聚糖-熒光素異硫氰酸酯葡聚糖
化學名：
葡聚糖(3´,6´-二羥基-3-氧代螺(異苯并呋喃--1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯
熒光素異硫氰酸酯-葡聚糖
熒光素基硫代氨基甲?；?葡聚糖
CAS號：60842-46-8
結構
定義
MW：重均分子量
Mn：數(shù)均分子量
DS：定義為多糖鏈中每個糖分子上取代分子的數(shù)目
特性
用熒光素對基于天然葡聚糖B512F所制備的特選葡聚糖組分進行標記，標記時采用穩(wěn)定的硫代氨基甲酰鍵連接基團，標記步驟不會導致葡聚糖發(fā)生任何降解1，F(xiàn)ITC-葡聚糖的DS范圍為0.002-0.008，在該取代低水平范圍內，反應對葡聚糖本身所帶來的變化被盡可能地減少了。這一點對滲透性研究而言非常重要。
FITC-葡聚糖以黃色/橙色粉末形式供應，其在水中可以自由溶解，也可以黃色溶液形態(tài)的鹽溶液形式供應。該產(chǎn)品也可溶于DMSO、甲酰胺等某些極性有機溶劑，但不溶于低級脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺?？梢酝ㄟ^在劇烈攪拌下將粉末緩慢加入到溫水（約60℃）中來實現(xiàn)高分子量組分的溶解。
分子量大于5 000道爾頓的葡聚糖分子在溶液中表現(xiàn)為柔性線團型（coil）鏈段。表1（下表）顯示了不同分子量分子的尺寸。葡聚糖和FITC-葡聚糖呈現(xiàn)牛頓流動特性，即粘度與剪切速率無關。
葡聚糖Mw | Stokes半徑Å | 回轉半徑Å |
|---|
2 x 106 | 270 | 380 |
1 x 106 | 199 | 275 |
500 000 | 147 | 200 |
200 000 | 130 | 130 |
100 000 | 69 | 95 |
70 000 | 58 | 80 |
40 000 | 44.5 | 62 |
10 000 | 23.6 | - |
表1.葡聚糖的分子尺寸。
光譜數(shù)據(jù)
圖1. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（10mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-葡聚糖70的熒光掃描光譜。激發(fā)波長：495nm；發(fā)射波長：520 nm。
圖2.FITC-葡聚糖在pH 4-9范圍內的熒光光譜（發(fā)射波長：520nm）
儲存和穩(wěn)定性
FITC-葡聚糖在體外和體內的穩(wěn)定性都非常好——只有在高pH（> 9）和高溫下，熒光素標記才有發(fā)生水解的風險。在37°C的兔血漿、肌勻漿、肝勻漿和尿液研究中，F(xiàn)ITC-葡聚糖的穩(wěn)定期均不短于3天，Mw無任何變化，熒光素組分釋放不可見。 在6％的TCA中，F(xiàn)ITC-葡聚糖可以在室溫下穩(wěn)定3天2。高壓滅菌的FITC-葡聚糖70溶液可以在8至50℃下儲存長達5個月，只有50℃樣品中的游離氨基-熒光素含量出現(xiàn)略微增加（1％）。FITC-葡聚糖在pH4下保持穩(wěn)定，但在pH9下，其熒光強度會在35℃、1個月內出現(xiàn)相當大的下降（24％）。數(shù)項研究3均證實了在實驗（1-6天）期間FITC-葡聚糖的體內穩(wěn)定性。
FITC-葡聚糖的應用
FITC-葡聚糖主要用于細胞和組織中的滲透性和運輸研究，但也可用于其他材料（過濾器、凝膠等）的滲透性研究。其有一點*優(yōu)勢在于通過測量熒光，可以提供健康或患病組織的實時滲透性定量數(shù)據(jù)?；铙w熒光顯微鏡具有高靈敏度，即使組織液中的熒光濃度低至1μg/ ml也可以檢測得到。人們已經(jīng)開發(fā)了數(shù)個模型來方便實時研究4,5，F(xiàn)ITC-葡聚糖也可用作細胞中的pH探針6,7。人們在偏振實驗中還發(fā)現(xiàn)，激發(fā)態(tài)的壽命與共軛之前的壽命差不多。
FITC-葡聚糖在以下研究領域都已表現(xiàn)出了自身價值（我們從各個主題的眾多文章中挑選出來的參考文獻）：
- 腸道組織滲透性研究8-10
- 腦和神經(jīng)系統(tǒng)滲透性研究11-13
- 腫瘤組織滲透性研究14-16
- 眼內滲透性研究17-19
- 腎組織滲透性研究20
圖3. 注入FITC-葡聚糖150后的頰囊圖像。第二張圖像顯示了注入組胺后微血管出現(xiàn)的滲漏。 （已獲得E.Svensjö許可）。
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