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胃蛋白酶（Pepsin）試劑盒說明書微板法
閱讀：207 發(fā)布時間：2023-12-20本試劑盒僅供科研使用
胃蛋白酶（Pepsin）試劑盒說明書 (貨號：WS0121W 微板法 48 樣)
一、產(chǎn)品簡介： 胃蛋白酶（Pepsin）是一種消化性蛋白酶，由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白 質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等 癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。 胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解生成含酚的氨基酸，含酚的氨基酸與福林酚反應(yīng)后顯藍 色；其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。
二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存條件 備注 提取液 液體 50mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×2 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部，每瓶 再加 13mL 蒸餾水溶解備用。 試劑三 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 3mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用前加 2mL 提取液，再用蒸餾水稀 釋 10 倍，即為 0.05mg/mL 酪氨酸。
三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、可調(diào)式移液器、天平、研缽、冰和蒸餾水。
四、胃蛋白酶活性測定： 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。4℃×3500rpm 離心 5min，取上清， 置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例 進行提取 ② 液體樣本：液體用提取液按照 1:1 的比例混合稀釋后，4℃×3500rpm，離心 5min， 取上清液檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 680nm。 ② 所有試劑解凍至室溫。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 50 50 試劑一 50本試劑盒僅供科研使用 2 37℃孵育 5min 試劑二 250 250 37℃孵育 10min 試劑一 50 37℃孵育 5min 后，3000rpm 離心 5min，上清液待測。 ④ 顯色反應(yīng)，在 EP 管中： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 標準管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 上清液 30 30 標準品 30 提取液 30 試劑三 150 150 150 150 試劑四 30 30 30 30 37℃孵育 20min 后（若渾濁則室溫 3000rpm 離心 5min），取 200μL 至 96 孔板中，于 680nm 處測定，讀取吸光值 A。ΔA=A 測定-A 對照（每個樣 本做一個自身對照）。 【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊，可以延長反應(yīng)時間 T（如 37℃孵育 10min 延長至 20min）或增加樣本 量 V1（如增至 100μL，則試劑二相應(yīng)減少），則改變后的反應(yīng)時間 T 和樣本量 V1 需代入計 算公式重新計算。 2. 若 A 測定值大于 1.5，可以減少樣本量 V1（如減至 20μL，用提取液相應(yīng)補充），則改變后的 樣本量 V1 需代入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算： 1、按樣本蛋白濃度計算： 酶活定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μg 酪氨酸為 1 個酶活單位(U)。 胃蛋白酶（U/mg prot）=[ΔA÷（A 標準-A 空白）×C 標準×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷（A 標準-A 空白）÷Cpr 2、按樣本鮮重計算： 酶活定義：37℃每 g 組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μg 酪氨酸為 1 個酶活單位(U)。 胃蛋白酶（U/g 鮮重）=[ΔA÷（A 標準-A 空白）×C 標準×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷（A 標準-A 空白）÷W 3、液體 LAP 活力的計算: 酶活定義：37℃每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μg酪氨酸為1個酶活單位(U)。 胃蛋白酶（U/mL）=[ΔA÷（A 標準-A 空白）×C 標準×V2]÷V1×2÷T =70×ΔA÷（A 標準-A 空白） V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.05mL； V2---第③歩反應(yīng)總體積，0.35mL； T---反應(yīng)時間，10min； C 標準---50μg/mL； W---樣本質(zhì)量，g； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒