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細(xì)胞說明書
閱讀：95 發(fā)布時間：2021-1-14| 提 供 商 | 上海卡努生物科技有限公司 | 資料大小 | 18.7KB |
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| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 28次 | |
| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 95次 |
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細(xì)胞名稱： | A10 ，大鼠主動脈血管平滑肌細(xì)胞 | ||
產(chǎn)品貨號： |
| 規(guī)格： | T25瓶或者2ml凍存管 |
生長特性： | 貼壁生長 | 傳代比例： | 細(xì)胞80-90%匯合時 1:2~1:4傳代 |
培養(yǎng)條件： | 90% DMEM，10%胎牛血清 ，100U/ml雙抗，37℃、5% CO2 | ||
凍存條件： | 70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO | ||
僅供科研使用，不可用于臨床診斷和治療
凍存細(xì)胞接收后的處理：
1）干冰運輸，收到細(xì)胞后推薦直接復(fù)蘇，轉(zhuǎn)入液氮暫存可能導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇率降低；
2）收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯(lián)系。
復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們。
2）75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細(xì)胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。
3）建議收到當(dāng)天不要消化處理，如果細(xì)胞長滿90%，可選擇傳代處理。
4）如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題，出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費重發(fā)服務(wù)。
注：發(fā)貨用培養(yǎng)基不可再次用來培養(yǎng)細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入1ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③細(xì)胞消化0.5-2min（具體時間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷），顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞回縮，即將脫壁而未脫壁時（可用槍輕輕吹打確認(rèn)細(xì)胞是否脫壁），加入培養(yǎng)基終止消化（若消化過度可能會對細(xì)胞存活率產(chǎn)生較大影響）；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
注：di一次傳代推薦1:2傳代，后續(xù)可根據(jù)細(xì)胞生長以及客戶需求自行確定。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻；
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶或60mm培養(yǎng)皿中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
②細(xì)胞消化0.5-2min（具體時間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷），顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞回縮，即將脫壁而未脫壁時（可用槍輕輕吹打確認(rèn)細(xì)胞是否脫壁），加入培養(yǎng)基終止消化（若消化過度可能會對細(xì)胞存活率產(chǎn)生較大影響）；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。