供貨周期 |
一周 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下,通過(guò)DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂系列過(guò)程。其中核DNA的復(fù)制倍增是整個(gè)過(guò)程的重要特征。細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)遺傳學(xué)腫瘤生物學(xué)免疫學(xué)藥理和藥代動(dòng)力學(xué)等研究領(lǐng)域。
質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)服務(wù)的質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)(mass cytometry,MC)就是將ICP-MS應(yīng)用到單個(gè)細(xì)胞的分析,原理是用純化的單元素同位素標(biāo)記抗體,然后使用ICP-MS檢測(cè)該元素離子峰。操作流程簡(jiǎn)單,如圖1所示,首先細(xì)胞用帶有金屬元素(一般是鑭系金屬)的特異性抗體標(biāo)記3-4,然后被送入質(zhì)譜流式細(xì)胞儀,細(xì)胞以單個(gè)細(xì)胞液滴狀態(tài)被霧化后進(jìn)入高溫等離子體,產(chǎn)生自由原子,四級(jí)桿選擇只通過(guò)鑭系金屬質(zhì)量范圍內(nèi)的離子,去除其余離子,利用飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOF mass spectrometry)檢測(cè)鑭系金屬離子的相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度。
傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)用熒光基團(tuán)作為報(bào)告分子,通過(guò)對(duì)發(fā)射光強(qiáng)度定量以確定目標(biāo)分子的表達(dá)量,但熒光基團(tuán)發(fā)射譜常有重合,尤其是在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量的情況下,難以區(qū)分多個(gè)熒光基團(tuán)。質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)使用單一分子量的穩(wěn)定鑭系金屬代替熒光基團(tuán)作為報(bào)告分子,元素質(zhì)譜分析儀能夠通過(guò)分子量準(zhǔn)確區(qū)分不同原子質(zhì)量,并且不同鑭系金屬質(zhì)量沒(méi)有信號(hào)重疊,增加了定量的準(zhǔn)確性。
目前,質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)可以同時(shí)對(duì)51個(gè)靶蛋白進(jìn)行檢測(cè),每秒檢測(cè)1000個(gè)細(xì)胞,平均每天可檢測(cè)100個(gè)樣品,檢測(cè)限為100個(gè)拷貝分子,已經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的鑭系金屬標(biāo)記抗體種類(lèi)超過(guò)400種;除常規(guī)蛋白外,質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾1,蛋白降解產(chǎn)物5,檢測(cè)細(xì)胞存活率,細(xì)胞大小,mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量6,DNA合成速率7以及蛋白酶活性8等的測(cè)定。
多路質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)
正如蛋白質(zhì)組學(xué)中的非標(biāo)記定量,質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)靶點(diǎn)的定量準(zhǔn)確性也受到不同儀器離子化效率的差異、儀器狀態(tài)等的影響;同時(shí),傳統(tǒng)的質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)每次只能檢測(cè)一個(gè)樣品,通量較低。因此,質(zhì)量標(biāo)簽細(xì)胞條碼技術(shù)(mass-tag cellular barcoding,MCB)應(yīng)運(yùn)而生。
細(xì)胞經(jīng)過(guò)藥物等處理后,用多聚甲醛固定后,使用MCB試劑對(duì)不同樣本的細(xì)胞進(jìn)行條形碼標(biāo)記,然后將不同樣本混合后進(jìn)行常規(guī)質(zhì)譜流式細(xì)胞分析前處理和檢測(cè)。最終通過(guò)檢測(cè)條形碼對(duì)應(yīng)的元素離子,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行樣品歸類(lèi)。