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[供應(yīng)]細(xì)胞活力檢測(cè)

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更新時(shí)間:2024-12-16 21:00:08

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MTT全稱(chēng)為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,化學(xué)名稱(chēng): 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT比色法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。

MTT全稱(chēng)為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,化學(xué)名稱(chēng): 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT比色法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

操作步驟
1.收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度1000- 10000 /孔。
2.一定條件培養(yǎng)細(xì)胞適當(dāng)時(shí)間,至細(xì)胞單層鋪滿(mǎn)96孔平底板,加入濃度梯度的藥物。
3.適當(dāng)條件培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間,倒置顯微鏡下觀(guān)察。
4.每孔加入10ul MTT溶液,繼續(xù)培養(yǎng)1-4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng),可先離心后棄去培養(yǎng)液,小心用PBS2-3遍后,再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5.終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。
6.每孔加入100ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
活力計(jì)算:
細(xì)胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A0加藥)-A(空白)]×100
A(加藥):具有細(xì)胞、MTT溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養(yǎng)基和MTT溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度
A0加藥):具有細(xì)胞、MTT溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度
細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
應(yīng)用范圍
1.抗腫瘤藥物篩選
2.細(xì)胞毒性試驗(yàn)
3.腫瘤放射敏感性測(cè)定
服務(wù)期限
1-2周。

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