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雙鏈特異性核酸酶

目錄號(hào)EA001; EA002; EA003; EA008

 

-選擇性切割DNA-RNA雜交雙鏈體中的ds DNA和DNA-

區(qū)分*匹配和

非匹配的短雙鏈體-對(duì)ss DNA和RNA無(wú)活性

-熱穩(wěn)定

-被EDTA抑制

 

      

雙鏈特異性核酸酶（DSN）是一種從紅金（Kamchatka）蟹的肝胰腺中純化的酶（Shagin 等，2002）。DSN對(duì)在DNA-RNA雜交雙鏈體中裂解雙鏈（ds）DNA和DNA表現(xiàn)出強(qiáng)烈的偏愛(ài)，并且實(shí)際上對(duì)單鏈（ss）DNA或單鏈或雙鏈RNA無(wú)活性。此外，該酶能夠區(qū)分*匹配和不*匹配的短DNA雙鏈體。DSN被廣泛用于全長(zhǎng)富集的cDNA標(biāo)準(zhǔn)化（Zhulidov 等，2004; Bogdanova 等，2011a）和用于下一代測(cè)序的標(biāo)準(zhǔn)化RNA-seq文庫(kù)的構(gòu)建（（Christodoulou 等。（2011年），Illumina DSN標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)議）。已批準(zhǔn)的DSN應(yīng)用列表還包括基因組DNA的標(biāo)準(zhǔn)化（Shagina 等，2010），cDNA耗竭和核糖體cDNA耗竭（Bogdanova 等，2009； Bogdanova 等，2011b； Yi 等，2011），減去cDNA（Peng 等，2008），SNP檢測(cè)（Shagin 等，2002; Liu 等，2011），構(gòu)建無(wú)重復(fù)的FISH探針（Swennenhuis 等，2012），多重?zé)晒鈾z測(cè)miRNA （Yin 等人，2012），定量端粒突出端測(cè)定（Zhao 等人，2008； Zhao 等人，2008）。（2011年）等。

 

產(chǎn)品       貓。＃    描述       尺寸       價(jià)錢(qián)       使用手冊(cè)（PDF）

雙鏈特異性核酸酶，凍干    來(lái)自Red King（Kamchatka）蟹肝胰腺的熱穩(wěn)定核酸酶，強(qiáng)烈希望裂解雙鏈DNA和DNA-RNA雜交雙鏈體中的DNA       10U        DSN用戶手冊(cè)

EA003     10U  evrogen

EA001     50U  evrogen

EA002     100 U  evrogen  

EA008     1000U    evrogen

 

使用Shagin 等人的改良方案從Red King（Kamchatka）蟹肝胰腺中純化DSN 。，2002。使用改良的Kunitz測(cè)定法（Kunitz，1950）測(cè)量DNAase活性，其中單位定義定義為：添加到50μg/ ml小牛胸腺DNA中的DSN量，導(dǎo)致每分鐘0.001吸收單位增加?；钚詼y(cè)定是在25°C，含有5mM MgCl 2的 50 mM Tris-HCl緩沖液（pH 7.15）中進(jìn)行的。

 

運(yùn)輸和儲(chǔ)存條件：

套件的所有組件均可在環(huán)境溫度下運(yùn)輸。到達(dá)后，所有組件都必須在-20°C下存儲(chǔ)。

 

研究產(chǎn)品：

-光誘導(dǎo)的高對(duì)比度光轉(zhuǎn)換

-可通過(guò)流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡輕松檢測(cè)

-無(wú)需輔因子，底物或化學(xué)染色

-適用于長(zhǎng)期追蹤細(xì)胞事件

 

       可光活化的熒光蛋白（PAFP）代表了監(jiān)視細(xì)胞事件的*工具。PAFP響應(yīng)于特定光的照射而改變光譜特性。近年來(lái)，PAFP已用于時(shí)空方式光學(xué)標(biāo)記和跟蹤活細(xì)胞，細(xì)胞器和細(xì)胞內(nèi)分子的新方法的開(kāi)發(fā)。PAFP成為超分辨率成像技術(shù)*的工具。此外，PAFPs為研究細(xì)胞生理學(xué)開(kāi)辟了新的可能性，特別是，它們?cè)试S仔細(xì)確定蛋白質(zhì)的半衰期。

 

應(yīng)用領(lǐng)域

跟蹤細(xì)胞，細(xì)胞器和蛋白質(zhì)的

運(yùn)動(dòng)PAFPs比光漂白技術(shù)（例如光漂白后的熒光恢復(fù)（FRAP）或光漂白中的熒光損失（FLIP））使細(xì)胞和蛋白質(zhì)的研究運(yùn)動(dòng)更，直接，且破壞更少。PAFP標(biāo)記的單個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞器或蛋白質(zhì)部分可以使用聚焦光束進(jìn)行光轉(zhuǎn)換。然后，可以直接看到活體組織內(nèi)的激活對(duì)象[Patterson and Lippincott-Schwartz，2002; Chudakov 等。，2004；Chapman 等。，2005；Gurskaya 等。，2006；Chudakov 等。，2007]。近年來(lái)，PAFP成為超分辨率成像技術(shù)*的工具[Subach 等。，2010]。

 

蛋白質(zhì)降解研究

PAFP允許仔細(xì)確定蛋白質(zhì)半衰期[Zhang 等。，2007]。用編碼與PAFP融合的靶蛋白的構(gòu)建體轉(zhuǎn)染細(xì)胞。融合蛋白和相應(yīng)熒光信號(hào)的穩(wěn)態(tài)濃度取決于蛋白合成和成熟速率以及蛋白降解速率。PAFP在整個(gè)細(xì)胞中進(jìn)行光轉(zhuǎn)化后，會(huì)出現(xiàn)一組*的熒光分子，這與新的PAFP分子的合成和成熟無(wú)關(guān)。因此，活化熒光的衰減直接對(duì)應(yīng)于PAFP標(biāo)記的蛋白質(zhì)的降解。激活信號(hào)的延時(shí)成像可以實(shí)時(shí)量化單個(gè)細(xì)胞水平的降解過(guò)程。

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