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PrimeSTAR HS DNA聚合酶

高保真PCR

 

PrimeSTAR HS DNA聚合酶是一種新型的高保真DNA聚合酶，可高效擴(kuò)增大型DNA產(chǎn)物（人基因組DNAgao8.5 kb；λDNAgao22 kb）。由于強(qiáng)大的3'→5'核酸外切酶活性，其卓yue的校對(duì)能力可實(shí)現(xiàn)其出色的性能?？贵w介導(dǎo)的熱啟動(dòng)（HS）功能可提高特異性，從而減少背景，并證明在要求苛刻的克隆和測(cè)序應(yīng)用中非常有用。PrimeSTAR HS  具有靈活方便的格式：

 

各個(gè)組件-Primeme HS HS  DNA聚合酶配有5X PrimeSTAR Buffer（含Mg 2+）試管和dNTPs管。

2X PCR預(yù)混液-包含PrimeSTAR HS DNA聚合酶，反應(yīng)緩沖液和dNTP的預(yù)混液，用于簡(jiǎn)單方便的PCR設(shè)置和少的移液步驟。

通過直接測(cè)序分析可以計(jì)算PrimeSTAR HS DNA聚合酶的保真度，與其他常用的間接表型分析（例如lacI）相比，可以提供對(duì)摻入錯(cuò)誤率的更真實(shí)估計(jì)。由于固有的致死和沉默突變，其他酶供應(yīng)商經(jīng)常使用的計(jì)算方法（如lacI）容易出錯(cuò)。

 

PrimeSTAR HS DNA聚合酶因其*的啟動(dòng)效率而還具有出色的擴(kuò)增效率和快速的反應(yīng)時(shí)間。使用僅5–15秒的短退火時(shí)間即可實(shí)現(xiàn)高特異性擴(kuò)增。

 

對(duì)于ju挑戰(zhàn)性的PCR應(yīng)用，PrimeSTAR HS的增強(qiáng)版本可輕松擴(kuò)增富含GC的序列，甚具有更高的保真度，并適用于長(zhǎng)距離PCR：

 

具有GC緩沖液的PrimeSTAR HS可對(duì)困難的富含GC的樣品（75％或更高）提供可靠的高保真擴(kuò)增。

PrimeSTAR Max產(chǎn)品提供了所有Takara Bio產(chǎn)品gao的保真度和kuai的擴(kuò)展時(shí)間。

PrimeSTAR GXL產(chǎn)品具有高保真度，并具有擴(kuò)增長(zhǎng)且富含GC或AT的目標(biāo)的能力。

 減

R010B     PrimeSTAR®HS DNA聚合酶      1,000伙 

一種高保真熱啟動(dòng)（HS）PCR DNA聚合酶，由于其強(qiáng)大的3'5'核酸外切酶活性而具有出色的校對(duì)能力。PrimeSTAR HS DNA聚合酶可有效擴(kuò)增高達(dá)8.5 kb的人類基因組DNA靶標(biāo)或22 kb的lambda DNA。酶隨附了優(yōu)化的緩沖液（Mg 2+加）和dNTP混合物的單獨(dú)試管。貓。＃R010B包含4個(gè)Cat。＃R010A。請(qǐng)參考目錄。＃R010A了解完整的產(chǎn)品文檔和資源。

R010A    PrimeSTAR®HS DNA聚合酶      250伙                  *     

一種高保真熱啟動(dòng)（HS）PCR DNA聚合酶，由于其強(qiáng)大的3'5'核酸外切酶活性而具有出色的校對(duì)能力。PrimeSTAR HS DNA聚合酶可有效擴(kuò)增高達(dá)8.5 kb的人類基因組DNA靶標(biāo)或22 kb的lambda DNA。酶隨附了優(yōu)化的緩沖液（Mg 2+加）和dNTP混合物的單獨(dú)試管。

 

總覽

高精度和強(qiáng)大的核酸外切酶活性，導(dǎo)低的錯(cuò)誤率（每250 kb僅12個(gè)錯(cuò)誤）

與標(biāo)準(zhǔn)Taq聚合酶相比，擴(kuò)增效率更高

即使使用富含GC的模板也具有出色的性能

對(duì)變化的反應(yīng)條件具有高度的耐受性（單個(gè)PCR循環(huán)方案可用于擴(kuò)增大小不同的產(chǎn)物）

使用人類基因組DNA擴(kuò)增靶標(biāo)8.5 kb，使用大腸桿菌基因組DNA 擴(kuò)增靶標(biāo)10 kb，使用lambda DNA 擴(kuò)增靶標(biāo)22 kb

由于提高了啟動(dòng)效率，反應(yīng)時(shí)間短

熱啟動(dòng)PCR酶可防止由于錯(cuò)誤的引物或引物消化而在反應(yīng)組裝過程中發(fā)生錯(cuò)誤的引發(fā)事件

更多信息

應(yīng)用領(lǐng)域

高保真PCR

cDNA文庫(kù)的擴(kuò)增

用于蛋白質(zhì)表達(dá)的cDNA克隆

定點(diǎn)誘變和突變基因分型（例如，SNP分析）

有關(guān)保真度比較的注意事項(xiàng)

我們使用測(cè)序分析來(lái)確定摻入錯(cuò)誤率，因?yàn)榇蠖鄶?shù)需要高保真擴(kuò)增的研究人員都執(zhí)行以下操作：PCR，克隆和測(cè)序。因此，通過直接序列分析確定錯(cuò)誤率與大多數(shù)研究人員在自己的應(yīng)用程序中使用的方法非常接近。請(qǐng)注意，使用不同保真度測(cè)量方法（例如，直接測(cè)序，Kunkel方法，Cline方法，lac I方法）獲得的值不能直接產(chǎn)生可比數(shù)據(jù)。

 

純度

將0.6 µg超螺旋pBR322 DNA或lambda DNA與10個(gè)單位的酶在74°C孵育1小時(shí)后，既未檢測(cè)到切口，內(nèi)切核酸酶，也未檢測(cè)到核酸外切酶活性。

 

存儲(chǔ)

運(yùn)輸和存放于–20°C。避免反復(fù)凍融和劇烈攪拌。解凍后，分配到PCR管中并儲(chǔ)存在–20°C。

 

性能

使用λDNA（擴(kuò)增的片段：8、10、12、15 kb）和人基因組DNA（擴(kuò)增的片段：0.5、1、2、4、6、8 kb）作為模板，通過單片段PCR證實(shí)了酶促性能。

 

PCR產(chǎn)品

使用PrimeSTAR HS DNA聚合酶獲得的大量PCR產(chǎn)物的末端會(huì)變鈍。結(jié)果，PCR產(chǎn)物可以直接克隆到平末端載體中。如有必要，在克隆前將PCR產(chǎn)物磷酸化。

 

批量，自定義和OEM信息

如果您對(duì)批量購(gòu)買，定制包裝，定制配方（包括無(wú)甘油和高濃度）或合作機(jī)會(huì)感興趣，請(qǐng)聯(lián)系我們，以討論您的需求或訪問我們的OEM頁(yè)面以提交查詢。

 

其他產(chǎn)品信息

有關(guān)存儲(chǔ)條件，產(chǎn)品組件和技術(shù)規(guī)格的信息，請(qǐng)參閱產(chǎn)品的分析證書。請(qǐng)參閱套件組件列表以確定套件組件。分析證書和試劑盒組件列表位于“文檔”選項(xiàng)卡下。

 

3.0常見問題

3.1：PrimeSTAR™建議的退火條件是什么？

Takara建議以下退火條件：

初始退火溫度應(yīng)以55°C為起點(diǎn)。

退火時(shí)間：由于PrimeSTAR具有很高的灌注效率，因此將退火時(shí)間設(shè)置為5秒?；?5秒

根據(jù)Tm值。較長(zhǎng)的退火時(shí)間會(huì)導(dǎo)致涂污。

當(dāng)Tm *＞ 55℃時(shí)：5秒。

當(dāng)Tm * ＜55℃時(shí)：15秒。

使用以下方法計(jì)算Tm值：* Tm計(jì)算公式：Tm（°C）= 2（NA + NT）+ 4（NC + NG）-5

僅對(duì)<25個(gè)堿基的引物使用此方法。對(duì)于引物> 25個(gè)堿基，將退火溫度設(shè)置為5秒。

注意：請(qǐng)按照提供的指導(dǎo)進(jìn)行操作。

3.2：何時(shí)應(yīng)使用3步與2步PCR循環(huán)方案？

通常，建議使用三步協(xié)議。但是，在瓊脂糖上觀察到產(chǎn)品涂抹時(shí)

凝膠電泳，或使用Tm> 70°C的引物時(shí)，建議使用兩步操作方案。

3.3：瓊脂糖凝膠電泳后，我觀察到我的PCR產(chǎn)物有污跡。問題是什么？

通常在PCR條件不理想時(shí)會(huì)觀察到PCR產(chǎn)物的涂片。嘗試使用以下一項(xiàng)或多項(xiàng)建議來(lái)修改PCR循環(huán)條件：

-減少退火時(shí)間，例如如果以15秒進(jìn)行退火，則將時(shí)間減少到5秒。

-將退火溫度提高到58-65°C。

-從3步切換為2步循環(huán)協(xié)議。

3.4：我的PrimeSTAR™反應(yīng)中獲得的PCR產(chǎn)物數(shù)量很少，觀察到很少或沒有觀察到

產(chǎn)品在我的瓊脂糖凝膠上。如何增加產(chǎn)量？

通常，PCR產(chǎn)物量少是引物與DNA模板退火不正確的結(jié)果。嘗試修改

您的退火條件：

-延長(zhǎng)退火時(shí)間，例如如果執(zhí)行退火5秒鐘，則將時(shí)間延長(zhǎng)到15秒鐘，或者

將退火溫度降50-53°C。

3.5：PrimeSTAR™反應(yīng)中建議的模板DNA推薦量是多少？

PrimeSTARTM反應(yīng)中使用的模板DNA的合適量隨DNA來(lái)源的不同而不同：

人類基因組DNA 5-500 ng

大腸桿菌基因組DNA 100 pg -100 ng

λDNA 10 pg-10 ng

質(zhì)粒10 pg-1 ng

 

3.6 dNTPs的濃度可以修改嗎？

過量的dNTP具有螯合作用，較高的dNTP濃度會(huì)降低反應(yīng)混合物的有效Mg2 +濃度。隨附的5X PrimeSTAR™緩沖液可提供1 mM的終Mg2 +反應(yīng)混合物終濃度

優(yōu)化后的dNTP終濃度為200μM。因此，dNTP的濃度不應(yīng)

被修改。

3.7：我的PrimeSTAR™產(chǎn)品的瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)使用哪種緩沖液？

建議將TAE Buffer用于使用PrimeSTAR™獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳

HS DNA聚合酶。使用TBE緩沖液可能會(huì)導(dǎo)致DNA條帶模式在凝膠底部擴(kuò)大。

3.8：PrimeSTAR™產(chǎn)生哪種類型的PCR產(chǎn)物末端？

用PrimeSTAR™HS DNA聚合酶擴(kuò)增的所有PCR產(chǎn)物均具有平末端。因此，他們可以直接

可克隆到平端載體中（如有必要，可在克隆前進(jìn)行磷酸化），但不能克隆到T載體中。

3.9：PrimeSTAR™產(chǎn)品在進(jìn)行限制性酶切消化之前是否需要任何特殊處理？

在對(duì)擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切消化之前，通過苯酚/lv仿萃取從反應(yīng)混合物中除去所有痕量的PrimeSTAR™HS聚合酶。特別是對(duì)于3'突出的限制酶，例如

Pst I，這些酶產(chǎn)生的3'突出末端，在消化過程中可能會(huì)被3'-5'核酸外切酶活性刪除

剩余量的PrimeSTAR™HS聚合酶。

3.10：我可以在測(cè)序反應(yīng)中直接使用PrimeSTAR™產(chǎn)品嗎？

Takara建議在直接測(cè)序之前，先用酚/lv仿提取PCR產(chǎn)物，以確保滅活任何剩余的3'-5'核酸外切酶聚合酶活性

 

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