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使用單克隆重組兔抗 c-Fos 抗體 226 008 改進(jìn)您的 c-Fos 實(shí)驗(yàn)

 原癌基因 c-fos 屬于即刻早期基因 (IEGs)，在大腦中快速而短暫地表達(dá) (Herrera 和 Robertson，1996)。它可以由各種刺激誘導(dǎo)，通常用作神經(jīng)元激活的標(biāo)志物（Morgan 等，1987；Gaiddon 等，1996；Chowdhury 等，2000；Gallo 等，2018；Wakhloo 等。 , 2020)。像許多其他 IEG 一樣，c-Fos 是一種轉(zhuǎn)錄因子。它作為異二聚體與 c-Jun 結(jié)合到 AP-1 結(jié)合位點(diǎn)（圖 1），并增強(qiáng)許多其他參與增殖、分化、凋亡或炎癥的基因的表達(dá)（Ye 等人，2014 年）。

c-Fos 實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)

動(dòng)物處理：在計(jì)劃對(duì)動(dòng)物進(jìn)行 c-Fos 實(shí)驗(yàn)時(shí)，您應(yīng)該了解影響您研究的技術(shù)缺陷。例如，您應(yīng)該考慮 c-Fos 表達(dá)是時(shí)間依賴性的，易受壓力影響，并且可以在幾分鐘后檢測(cè)到（Herrera 和 Robertson，1996）。重要的是要考慮到許多因素，如動(dòng)物處理本身（例如針頭注射）或在黑暗階段暴露在光線下（晝夜節(jié)律激活）會(huì)影響 c-Fos 表達(dá)（Asanuma 和 Ogawa，1994 年；Herrera 和 Robertson，1996 年） ）。因此，必須在適當(dāng)?shù)膶?duì)照組中準(zhǔn)確地計(jì)劃和進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以避免假陽(yáng)性結(jié)果。

IHC 方案：您應(yīng)該關(guān)心的另一點(diǎn)是您的免疫組織化學(xué) (IHC) 方案。似乎 c-Fos 陽(yáng)性細(xì)胞的總數(shù)取決于閾值。許多參數(shù)會(huì)影響 c-Fos 陽(yáng)性細(xì)胞的可檢測(cè)數(shù)量：組織儲(chǔ)存條件、切片方法（低溫恒溫器或振動(dòng)切片機(jī)）、染色參數(shù)（例如孵育溫度）、信號(hào)增強(qiáng)試劑（Berghorn 等，1994；Werner 等， 1996 年；Mayer 和 Bendayan，2001 年），最重要的是，一抗選擇。

c-Fos 抗體：一抗的特異性、靈敏度和信噪比不同，這些特性會(huì)影響您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，我們的目標(biāo)是提供高度特異性和一致的 c-Fos 抗體，以支持科學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。由于單克隆抗體與多克隆抗體相比具有多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)，因此我們開(kāi)發(fā)了一種新的單克隆重組兔抗 c-Fos 抗體。

單克隆重組 c-Fos 抗體的優(yōu)勢(shì)

抗體具有由兩條重鏈和兩條輕鏈組成的共同結(jié)構(gòu)（圖 2）。重鏈和輕鏈都包含負(fù)責(zé)目標(biāo)識(shí)別的物種特異性恒定區(qū)和可變序列（Davies 和 Metzger，1983）。

在源自特定雜交瘤細(xì)胞系的單克隆抗體制劑中，所有單個(gè)抗體分子都是相同的，并共享相同的抗原識(shí)別位點(diǎn)。相比之下，多克隆抗體（如兔 c-Fos 抗體 226 003）由靶識(shí)別序列不同的抗體分子混合物組成。一旦血清用完，就必須對(duì)新動(dòng)物進(jìn)行免疫。獲得的新血清包含具有新的特異性和親和性的 c-Fos 抗體的新混合物，導(dǎo)致關(guān)于多克隆 c-Fos 抗體的實(shí)驗(yàn)性能的批次之間的差異。

使用我們的單克隆重組兔 c-Fos 抗體 226 008，我們*地解決了批次間差異的問(wèn)題。我們對(duì)我們一貫表現(xiàn)良好的大鼠單克隆 c-Fos 抗體 226 017 的 c-Fos 目標(biāo)識(shí)別域進(jìn)行了測(cè)序，并將它們?nèi)诤系酵?/span> IgG 的恒定抗體區(qū)域（圖 3）。

這種高度明確的單克隆重組抗體可以在受控條件下作為無(wú)限資源在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)，并且批次之間的差異最小。它在我們測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用中表現(xiàn)出好的性能，相當(dāng)于甚至優(yōu)于我們好的兔多克隆 c-Fos 批次（圖 4）。雖然多克隆兔抗 c-Fos 抗體 226 003 對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的變化非常敏感（例如，IHC 實(shí)驗(yàn)中的孵育溫度對(duì)信號(hào)強(qiáng)度有影響），但單克隆重組兔抗 c-Fos 抗體 226 008導(dǎo)致在各種實(shí)驗(yàn)設(shè)置中獲得穩(wěn)健的染色結(jié)果，因此是您實(shí)驗(yàn)的*。

隨著時(shí)間的推移，這種單克隆抗體將用于許多不同的應(yīng)用，收集到的所有信息都將有助于更好地表征這種研究試劑。

與多克隆抗體相比，這些信息會(huì)積累并且永遠(yuǎn)不會(huì)丟失，使這種研究試劑成為您手中越來(lái)越有價(jià)值和可靠的工具。

圖 4：標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用 WB、ICC、IHC 和 IHCP 中 SySy c-Fos 抗體“226 003"、“226 017"和“226 008"的比較

圖 4：?jiǎn)慰寺≈亟M兔抗 c-Fos 抗體 226 008 在我們所有的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用中都表現(xiàn)出優(yōu)異的性能。在相同實(shí)驗(yàn)條件下將重組兔抗c-Fos抗體226 008與單克隆大鼠抗c-Fos抗體226 017和多克隆兔抗c-Fos抗體226 003進(jìn)行比較。在 IHC 和 IHC-P 實(shí)驗(yàn)中，c-Fos 抗體用于小鼠和大鼠海馬切片的間接免疫染色（顯示小鼠切片；IHC：c-Fos = 紅色，DAPI = 藍(lán)色；IHC-P：c-Fos = 棕色，蘇木精 = 藍(lán)色）。在 ICC 實(shí)驗(yàn)中，c-Fos 抗體用于大鼠海馬神經(jīng)元的間接免疫染色（c-Fos = 紅色，MAP 2 188 011/188 002 = 綠色，DAPI = 藍(lán)色）。在蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)中，在 TPA 刺激的 HeLa 細(xì)胞的核提取物中檢測(cè)到 c-Fos（檢測(cè)：AP 染色）。

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