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介紹

 

沙門氏菌致突變性檢測試劑盒中包含的材料幾乎包括所有如Maron所述，進行“艾姆斯分析"所需的供應

&Ames（Maron，D.M.和B.N.Ames，沙門氏菌改良方法）突變試驗，突變研究，113:173-2151983）和Mortelmans&Zeiger（Mortelmans，K.和E.Zeiger，艾姆斯沙門氏菌/微粒體致突變性分析，突變研究，455:29-602000）。本手冊簡要概述了測試的重要方面-我們強烈建議您仔細閱讀其中一個在您嘗試執(zhí)行以下操作之前，請參閱這些文件和OECD指南471化驗MOLTOX®的所有元件該套件采用最高標準配方和制造質(zhì)量和部件符合Maron&Ames的建議（同上）。提供的某些材料（如STD）™ 冷凍干燥（S9）已經(jīng)過測試由我們的實驗室專門開發(fā)用于包含在分析試劑盒中。大部分工具包中包含的材料附有GLP級質(zhì)量控制和配方說明-您可以放心，每個藥盒的每個元素都已在分析中*測試性能。

 

MOLTOX®

 

沙門氏菌致突變性檢測試劑盒供個人使用  精通微生物學的科學和藝術(shù)；使用嚴格的無菌技術(shù)是必要的

 

對于成功應用工具包中包含的材料至關(guān)重要。而試劑盒中包括的細菌菌株（鼠傷寒沙門菌菌株TA1535、TA1537、TA98和TA100）是減毒的，它們具有潛在的致病性，必須加以處理  照著如果你對菌株的安全處理有任何疑問在您咨詢我們之前，請不要繼續(xù)使用本工具包中包含的內(nèi)容或已獲得熟練生物化學家的建議；或微生物學家。

 

“Ames分析"的性能包括幾個不同的實驗步驟；例如。，試驗設(shè)計；S9混合配方；加藥和電鍍；表型確認；目標細胞效價測定；閱讀（計數(shù)）和分析。中包含的材料選擇工具包是為了在以下方面為用戶提供相當大的靈活性：測試設(shè)計。本手冊旨在幫助使用工具包內(nèi)容；本手冊中提供的信息旨在補充馬龍和艾姆斯，摩特勒曼和澤格爾的報紙。本手冊中包含的說明雖然以逐步的方式呈現(xiàn)，但可以修改-如果您希望在分析的任何階段獲得幫助，請聯(lián)系我們的客戶服務(wù)，我們將很高興與您合作，幫助解決任何可能出現(xiàn)的問題。

 

化驗

 

MOLTOX®

 

試劑盒包含四種測試菌株：TA1535、TA1537、TA98和TA100在組氨酸操縱子中構(gòu)建具有不同損傷的菌株（見表1，莫特爾曼和澤格爾）。這種突變使它們不能合成組氨酸，即。它們是需要外源性組氨酸的組氨酸營養(yǎng)缺陷型。另外，TA1535，TA1537，TA98和TA100改變了細胞壁（rfa），增加了細胞對某些物質(zhì)的滲透性高分子量材料。這些菌株在DNA修復編碼中也有一個損傷導致對各種誘變劑敏感性增加的基因（uvrB）。從此病變延伸至生物素合成基因（bio），生物素也是生長所必需的]。測試菌株TA98和TA100攜帶一個質(zhì)粒（pKM101），其作用是增加易出錯的DNA修復系統(tǒng)的活性和對抗生素的耐藥性 氨芐西林、測試菌株TA1535和TA1537不含質(zhì)粒。由于測試菌株的特性，“Ames分析法"特別適用于誘變活性檢測。幾種測試菌株對DNA成像化學誘變劑的反應不同，因此通常組合使用。每個由于特定的環(huán)境因素，該菌株傾向于對特定類別的致突變化學物質(zhì)產(chǎn)生反應 組氨酸操縱子損傷。然而，暴露于誘變劑可能導致遺傳變異組氨酸操縱子的逆轉(zhuǎn)導致野生型表型的恢復；突變體的組氨酸操縱子功能“恢復"，并能合成組氨酸。分析取決于區(qū)分組氨酸營養(yǎng)缺陷型（測試員）的能力菌株）和組氨酸原營養(yǎng)體（突變體）。相應地，目標細胞被鍍在表面上含有微量組氨酸的培養(yǎng)基，可進行幾輪細胞分裂必須“修復"突變事件；組氨酸迅速耗盡，導致細胞停止生長非突變細胞的生長。如果存在致突變化學物質(zhì)，（相對）罕見改變的組氨酸操縱子可能發(fā)生逆轉(zhuǎn)，導致生長的繼續(xù)微量組氨酸耗盡后。出現(xiàn)在組氨酸限制酶上的回復突變菌落培養(yǎng)皿代表原生動物，它們要么是自發(fā)產(chǎn)生的，要么是由于細菌的作用誘變劑。

 

以下章節(jié)描述了進行基本四種應變的程序

 

化驗大多數(shù)情況下，所述方法直接取自Maron&Ames（同上）以及后來的Mortelmans&Zeiger。如果您之前沒有使用分析，我們建議您嚴格遵守這些說明；有經(jīng)驗的方法將查找有關(guān)STDiscs使用的有用信息™, 四元計算機™ 盤子，和凍干S9。

 

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