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受歡迎的加載控制 ATP1A1(Na，K-ATP 酶 α1) β 肌動蛋白和 β 微管蛋白 COX IV 和 VDAC1GAPDHHistone H3和 Lamin B1ProductsAnti-β 肌動蛋白小鼠 mAb 加載控制目錄號 AT0001測試應用程序 WB: 1/1000。預測分子量: 42kDa。尚未在其他應用程序中測試。最佳稀釋度/濃度應由最終用戶確定。反應性小鼠，大鼠，人

抗 β-肌動蛋白小鼠單克隆抗體加載控制目錄編號: AT0001Actin 是一種普遍存在的真核蛋白，是細胞骨架的主要組成部分。哺乳動物中至少有六種同種型。非肌肉 β-肌動蛋白和 γ-肌動蛋白也稱為細胞質(zhì)肌動蛋白，主要在非肌肉細胞中表達，控制細胞結(jié)構(gòu)和運動。Α-心肌肌動蛋白和 α-骨骼肌肌動蛋白分別在橫紋心肌和骨骼肌中表達，平滑肌肌動蛋白 α-和 γ-肌動蛋白分別主要存在于血管平滑肌和腸平滑肌中。

大小: 100μL 濃度: 1毫克/毫克可用性: 庫存概述/小鼠對 β-肌動蛋白的單克隆抗體[7G6]-加載控制反應性小鼠，大鼠，人體測試應用/WB: 1/1000。預測分子量: 42kDa。尚未在其他應用程序中測試。最佳稀釋度/濃度應由最終用戶確定。產(chǎn)品圖片這種抗體檢測內(nèi)源性 β-肌動蛋白水平。單克隆號: 7G6同種型小鼠 IgG1Form 液，1mg/mL 小鼠單克隆免疫球蛋白100μg，pH7.3(+/-0.1) ，50% 甘油，0.1 mg/mL BSA (IgG，無蛋白酶)作為穩(wěn)定劑，0.02% 氮化鈉作為防腐劑。貯存指引短期(1-2星期)貯存在攝氏4度以下。配料及貯存在攝氏零下20度，避免冷凍/解凍循環(huán)。數(shù)據(jù)庫鏈接 SwissProt: P60709 Human，SwissProt: P60710 Mouse，SwissProt: P60711 RatHostMouse 所有泳道: 1:1000泳道的抗 β 肌動蛋白抗體1: HelaLanes2: NIH3T3Lanes3: PC-12推薦的二抗: 山羊抗小鼠 IgG-HRP (Engibody，目錄號: AT0098)推薦的 ECL: ECL Pico-DetectTM Western 化學發(fā)光 HRP 底物(Engibody，目錄號: IF6747) 在0.5 mL 冰冷的細胞裂解緩沖液中裂解大約107個細胞(下面提供的制劑)。該緩沖液是一種修飾的 RIPA 緩沖液，適用于回收大多數(shù)蛋白質(zhì)，包括膜受體、細胞骨架相關(guān)蛋白和可溶性蛋白。這種細胞裂解緩沖制劑可作為一個單獨的產(chǎn)品，需要補充蛋白酶抑制劑立即使用前(貓。# FNN0011，溫度計)。其他細胞裂解緩沖液制劑，如 Laemmli 樣品緩沖液和 Triton-X 100緩沖液，也與本程序兼容。對于每個特定的應用，可能需要對細胞刺激方案和細胞裂解過程進行額外的優(yōu)化。將裂解物以14,000 x g 離心10分鐘，清除細胞碎片?；蛘?，裂解物可以在100,000 x g 下超離心30分鐘以獲得更大的澄清。小心地將澄清的細胞裂解物倒入干凈的試管中，并用合適的方法測定蛋白質(zhì)濃度，如布拉德福德試驗。建議使用聚丙烯管儲存細胞裂解物。用等體積的2xLaemmli 樣品緩沖液(125mM Tris，pH6.8,10% 甘油，10% sDS，0.006% 溴酚藍和130mM 二硫蘇糖醇[ dTT ])反應裂解物的等分試樣，并在100 °C 下將混合物煮沸90秒。將10 ~ 30μg 的細胞裂解物加入適當?shù)膯我话俜直然蛱荻任⒛z孔中，用 SDS-PAGE 電泳分離蛋白質(zhì)。在準備西藥轉(zhuǎn)移時，切一塊比凝膠稍大的 PVDF。膜在甲醇中浸泡1分鐘，然后用 DDH2O 沖洗5分鐘?；蛘?，可以使用硝化纖維素。在轉(zhuǎn)移緩沖液(配方如下)中浸泡薄膜、2片 Whatman 紙和 Western 儀器海綿2分鐘。將凝膠和薄膜組裝到夾層裝置中。將蛋白質(zhì)以140mA 的溫度在室溫下轉(zhuǎn)移6 ° C 0-90分鐘。轉(zhuǎn)移后，用 Tris 緩沖鹽水沖洗膜2分鐘。用封閉緩沖液(配方如下)在4 °C 下封閉膜過夜，或在室溫下封閉膜一小時。在補充有1% 無 Ig BSA 和0.1% 吐溫 -20的 Tris 緩沖鹽水中以1:1000起始稀釋度將封閉的印跡與一抗在4 °C 孵育過夜或在室溫下孵育2小時。用添加0.1% 吐溫20的 Tris 緩沖鹽水洗滌印跡。使用合適的第二抗體，如山羊抗兔 IgG 結(jié)合的 HRP (Cat。# AT0097-100ul，Engibody)或山羊抗小鼠 IgG 結(jié)合 HRP (Cat。# AT0098-100ul，Engibody)與您的化學發(fā)光試劑和儀器一起使用。故障排除指南西部印跡故障排除1。沒有信號。高背景3。非特定波段4。波段大小錯誤5。黑色/灰色污點上的白色條紋6。“抹黑"1。故障排除: 無信號樣品準備•未經(jīng)測試的物種？積極控制。檢查校準。?樣本中或凝膠上的抗原不足。轉(zhuǎn)移到膜上•轉(zhuǎn)移不良。?過度清洗。阻塞•太多阻塞。優(yōu)化封閉劑、濃度和時間•交叉反應封閉劑/抗體。抗體孵化和檢測•抗體不足。?第二抗體不正確。•檢測試劑盒舊基質(zhì)無效。膜的選擇。阻塞•需要阻塞更長時間。•優(yōu)化封堵劑、濃度。•封閉劑與一級或二級封閉劑之間的交叉反應。?磷酸化特異性蛋白質(zhì): 使用酪蛋白阻斷?？贵w孵化和檢測•一級抗體濃度過高。?孵化溫度過高。細胞系可以積累不同的蛋白質(zhì)表達譜。•蛋白質(zhì)有多種修飾形式，改變了流動性。目標蛋白質(zhì)成片段-被蛋白酶降解或切割。•剪接變體/同種型或可能來自同一家族的蛋白質(zhì)。?蛋白質(zhì)的多聚體(二聚體)(還原和變性)。•樂隊可能不是特定的。運行無主控制阻塞•阻塞不足。優(yōu)化注意力，時間?？贵w孵化和檢測•一級或二級抗體濃度過高。抗體尚未提純。除非在數(shù)據(jù)表中另有說明，否則確保樣品被減少和變性。•檢查異構(gòu)體。•樣本是否為重組片段？這些將運行在不同的大小。過多的一抗和/或過多的二抗。超載，蛋白質(zhì)降解。

 

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