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馬傳染性貧血
EIAV 測(cè)試規(guī)則對(duì)于美國(guó)客戶: VMRD，符合聯(lián)邦法規(guī)，將只運(yùn)送 EIAV 測(cè)試包到美國(guó)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室。在美國(guó)，EIAV 檢測(cè)試劑盒的銷(xiāo)售和使用僅限于經(jīng)州和聯(lián)邦(USDA)動(dòng)物衛(wèi)生官員批準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室。美國(guó)國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室將定期提供編碼檢查試驗(yàn)樣本，以評(píng)估美國(guó)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室的能力。有關(guān)成為 EIAV 許可的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的問(wèn)題，請(qǐng)與美國(guó)農(nóng)業(yè)部聯(lián)系。
血清有完整的分析證書(shū)，其中包括 AGID 中的反應(yīng)照片以及在 VMRD 實(shí)驗(yàn)室中運(yùn)行的 ELISA 反應(yīng)的光密度。這些參考血清是用于 EIA ELISA 檢測(cè)的質(zhì)量保證的參考樣品。
VMRD 的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)馬血清中的馬傳染性貧血病毒(EIAV)抗體。樣品血清 EIAV 抗體與包被在塑料孔上的重組 EIAV p26抗原結(jié)合。非特異性抗體被洗去，平板結(jié)合的 EIAV 特異性抗體捕獲 HRP- 重組 p26蛋白結(jié)合蛋白無(wú) Fab 抗原結(jié)合位點(diǎn)。無(wú)界結(jié)合物被沖走，并且結(jié)合 HRP 標(biāo)記抗原的存在是通過(guò)添加酶底物和隨后的藍(lán)色產(chǎn)品開(kāi)發(fā)來(lái)檢測(cè)的。停止溶液的加入減緩了酶的反應(yīng)，并將產(chǎn)物的顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色。截止陽(yáng)性對(duì)照提供了一個(gè)用于視覺(jué)讀取結(jié)果的顏色參考，以及一個(gè)用于用微板吸光度光譜儀讀取測(cè)定結(jié)果的光密度(OD)參考。黃色或 OD 等于或大于陽(yáng)性對(duì)照表明樣品血清中存在 EIAVp26抗體。顏色或 OD 低于陽(yáng)性對(duì)照表明沒(méi)有檢測(cè)到 EIAV p26的抗體。 VMRD 的 EIAV ELISA 是快速和方便的-總孵育時(shí)間只有35分鐘，沒(méi)有樣品稀釋?zhuān)挥袃纱蜗礈?/span>-但它是高度特異和敏感的。 VMRD 的 ELISA 敏感性是相當(dāng)?shù)幕騼?yōu)于其他美國(guó)農(nóng)業(yè)部許可的 ELISA 滴定陽(yáng)性樣品和檢測(cè)“弱樣品"
工具包程序概述
1.將50μl 樣品和對(duì)照轉(zhuǎn)移到抗原涂覆板2的細(xì)胞內(nèi)。在室溫下培養(yǎng)10分鐘3。洗一次，洗四次。加入50μl 抗原-過(guò)氧化物酶結(jié)合物5。在室溫下培養(yǎng)10分鐘6。洗四次，七次。加入50μl 基質(zhì)溶液8。在室溫下培養(yǎng)15分鐘9。加入50μl 停止溶液10。讀在450納米或眼睛
如果樣本產(chǎn)生的 OD 大于或等于陽(yáng)性對(duì)照的平均值，則為陽(yáng)性。如果樣本產(chǎn)生的 OD 小于陽(yáng)性對(duì)照的平均值，則為陰性。為使試驗(yàn)有效，正面控制的 OD 應(yīng)大于或等于負(fù)面控制的 OD 的1.5倍。負(fù)面控制的 OD 應(yīng)小于或等于0.15。為了測(cè)試是有效的時(shí)候閱讀的眼睛，積極控制應(yīng)該有可見(jiàn)的黃色和負(fù)面控制應(yīng)該有沒(méi)有或微弱的可見(jiàn)的顏色是小于積極控制。產(chǎn)生陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果的樣品送交國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室(NVSL)確認(rèn)。
EIA 參考血清提供 EIA 陽(yáng)性參考血清。這些馬來(lái)源血清含有一定水平的抗體，在 VMRD 的 EIA ELISA 中呈強(qiáng)、中或弱陽(yáng)性反應(yīng)。每一小瓶血清都有一份完整的分析證書(shū)，其中包括在 AGID 中的反應(yīng)照片以及在 VMRD 實(shí)驗(yàn)室中運(yùn)行的 ELISA 反應(yīng)的光密度。這些參考血清是用于 EIA ELISA 檢測(cè)的質(zhì)量保證的參考樣品。
關(guān)于藍(lán)舌病病毒藍(lán)舌病是一種傳染性的，非傳染性的，節(jié)肢動(dòng)物傳播的，野生和家養(yǎng)反芻動(dòng)物的病毒性疾病。在牛通常是亞臨床感染，而在綿羊通常以急性卡他性粘膜炎癥和冠狀帶充血為特征。骨骼和冠狀動(dòng)脈肌肉存在退行性改變，導(dǎo)致虛弱、恢復(fù)期延長(zhǎng)和重大經(jīng)濟(jì)損失。藍(lán)舌病毒(BTV)屬于眼病毒屬，呼腸孤病毒科。藍(lán)舌病的實(shí)驗(yàn)室診斷主要是通過(guò)分離病毒來(lái)確定的。病毒在 Vero 或 BHK 21細(xì)胞中分離出來(lái)，其存在通過(guò)免疫熒光證實(shí)。診斷這種疾病的血清學(xué)方法有 AGID、 ELISA、 cELISA 和免疫熒光。陽(yáng)性結(jié)果證實(shí)暴露于 BTV，但不一定是攜帶者狀態(tài)。
VMRD 的藍(lán)舌病毒 cELISA v2VMRD 的競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(cELISA)檢測(cè)反芻動(dòng)物血清中的藍(lán)舌病毒抗體。它已經(jīng)被證明可以檢測(cè)所有24種已知的藍(lán)舌病毒血清型(BTV) ，而不能檢測(cè)血清型1或2的獸疫出血癥病毒(EHDV)抗體。與幾項(xiàng)研究中的各種基準(zhǔn)相比，該試劑盒顯示出好的敏感性和特異性。VMRD 的新 BTV cELISA v2檢測(cè)試劑盒提供了與原始版本(總孵育時(shí)間40分鐘)相同的快速和方便的特性，以及包括蒸餾水清洗在內(nèi)的新特性。美國(guó)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的18個(gè)月的保質(zhì)期進(jìn)一步提高了這種價(jià)格有競(jìng)爭(zhēng)力的檢測(cè)方法的經(jīng)濟(jì)性，也證明了試劑盒的穩(wěn)定性。 VMRD 的藍(lán)舌病毒 AGIDVMRD 的藍(lán)舌病毒瓊脂免疫擴(kuò)散(AGID)試驗(yàn)檢測(cè)到反芻動(dòng)物血清中針對(duì)藍(lán)舌病毒的沉淀抗體。還檢測(cè)到流行性出血病病毒(EHDV)的抗體。如果檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，則檢測(cè)血清將形成一條與參考線融合的線，或者導(dǎo)致陽(yáng)性參考線在檢測(cè)血清附近向內(nèi)偏移而不形成可見(jiàn)線。否定不會(huì)形成一條線，也不會(huì)造成正參考線的偏離。
CAEV 的研究在 VMRD 有著悠久的歷史。VMRD 的主席斯科特 · 亞當(dāng)斯是最初分離 CAEV 并在20世紀(jì)70年代末和80年代初表征該病及其控制的研究小組的成員。VMRD 競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(cELISA)已被批準(zhǔn)用于羊血清中檢測(cè)山羊關(guān)節(jié)炎腦炎病毒(CAEV)抗體和綿羊進(jìn)行性肺炎病毒(OPPV)抗體。我們的小型反芻動(dòng)物慢病毒(SRLV) cELISA 測(cè)試了由山羊脾細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合衍生的專(zhuān)有異種單克隆抗體，其具有用于 cELISA 的優(yōu)異特征。這種抗體與 HRP 結(jié)合，用于與血清抗體競(jìng)爭(zhēng)與微滴度板結(jié)合的抗原。除了這里總結(jié)的驗(yàn)證研究之外，還證實(shí)了 VMRD 的 SRLV cELISA 檢測(cè)試劑盒的*質(zhì)量。1關(guān)于 CAE 和 OPPCAE 和 OPP (也稱(chēng)為 maedi-visna)分別是山羊和綿羊的持續(xù)慢病毒感染。分子分析表明，這些病毒非常相似，它們常被歸類(lèi)為小反芻動(dòng)物慢病毒(SRLV)。多發(fā)性關(guān)節(jié)炎是 CAEV 感染的主要臨床表現(xiàn)，而 OPP 典型表現(xiàn)為進(jìn)行性肺炎引起的呼吸困難和消瘦。大多數(shù)感染 SRLV 的綿羊和山羊沒(méi)有表現(xiàn)出臨床疾病，但仍然是該病毒的持續(xù)攜帶者。病毒傳播的主要方式是垂直通過(guò)牛奶和初乳。呼吸道分泌物和糞便也是感染性病毒的溫床。在可靠的診斷工具的支持下，良好的管理實(shí)踐是控制疾病傳播的最佳手段。參考文獻(xiàn)1 L.M. 的赫爾曼等人說(shuō): “用于檢測(cè)血清抗體山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒的競(jìng)爭(zhēng)抑制酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn): 成功除的診斷工具。"克林。Diagn.實(shí)驗(yàn)室。免疫系統(tǒng)。
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