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應(yīng)用圖像細胞儀促進生物制品和rAAV生產(chǎn)的細胞系開發(fā)
基于生物制品和AAV的基因療法在疾病治療方面獲得了更多的市場額。然而，開發(fā)一種強大而高效的哺乳動物細胞系來生產(chǎn)它們是具有挑戰(zhàn)性的，并且通常需要廣泛的細胞表征。歷史，流式細胞儀用于這些基于細胞的測定。然而，流式細胞儀相對昂貴，并且需要大量的操作和維護培訓(xùn)。最近，隨著計算能力和高質(zhì)量相機傳感器的提高，基于圖像的細胞術(shù)得到了創(chuàng)新，為細胞系工藝開發(fā)提供了一種精確且具有成本效益的替代方案。在這項工作中，我們描述了一種細胞系開發(fā)工作流程，該工作流程結(jié)合了基于圖像的細胞儀，即Countstar Rigel，用于分別使用表達抗體和rAAV載體的CHO和HEK293細胞進行轉(zhuǎn)染效率評估和穩(wěn)定池評估。在兩個案例研究中，我們證明：
Countstar Rigel提供了與流式細胞術(shù)相似的檢測精度。
基于Countstar Rigel的池評估可以幫助確定單細胞克?。?span>SCC）所需的組。
Countstar Rigel結(jié)合的細胞系開發(fā)平臺實現(xiàn)了2.5g/L mAb滴度。
我們還討論了使用Countstar作為基于rAAV DoE的優(yōu)化目標(biāo)的另一層的可能性。
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應(yīng)用Countstar FL圖像細胞儀進行細胞周期定量分析
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介紹
在細胞周期分析中，測量DNA結(jié)合染料的摻入已經(jīng)是確定細胞DNA含量的認(rèn)方法。碘化丙啶（PI）是一種常用于測量細胞周期的核染色染料。在細胞分裂中，含有增加量的DNA的細胞顯示出成比例增加的熒光。熒光強度的差異用于確定細胞周期每個階段的DNA含量。Countstar Rigel系統(tǒng)（圖1）是一種智能、直觀、多功能的細胞分析儀器，可以在細胞周期分析中獲得精確的數(shù)據(jù)，并可以通過細胞活力測定檢測細胞毒性。易于使用的自動化程序可指導(dǎo)您通過成像和數(shù)據(jù)采集完成細胞測定。
應(yīng)用Countstar FL圖像細胞儀研究細胞毒性
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介紹
細胞毒性測定在許多實驗室中被常規(guī)用于各種目的，從評估細胞培養(yǎng)物的健康到評估一組化合物的毒性。用于這些測定的測量工具需要可靠、易于使用且相對快速。Countstar Rigel系統(tǒng)（圖1）是一種智能、直觀的細胞分析儀器，可簡化各種細胞測定，包括轉(zhuǎn)染、凋亡、細胞表面標(biāo)記、細胞活力和細胞周期評估。該系統(tǒng)提供了穩(wěn)健的熒光定量結(jié)果。易于使用的自動化程序可指導(dǎo)您完成細胞測定形式的成像和數(shù)據(jù)采集。
使用293和碘化丙啶的GFP轉(zhuǎn)染效率測定
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介紹
綠色熒光蛋白（GFP）是一種由238個氨基酸殘基（26.9kDa）組成的蛋白質(zhì)，當(dāng)暴露于藍色至紫外線范圍的光時表現(xiàn)出明亮的綠色熒光。在細胞和分子生物學(xué)中，GFP基因經(jīng)常被用作表達的報告基因。在修飾的形式中，它已被用于制造生物傳感器，并且已經(jīng)創(chuàng)造了許多表達GFP的動物，作為基因可以在給定的生物體中表達的概念證明，或者在選定的器官、細胞或興趣中表達。GFP可以通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)引入動物或其他物種，并保留在它們及其后代的基因組中。
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