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普及工具

蛋白質(zhì)泛素化是一種控制蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)機(jī)制：蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)降解和空間定位，由鏈特異性多泛素化和/或單泛素化介導(dǎo)。Signal Seeker™泛素化工具具有捕獲任何靶蛋白的單泛素化和多泛素化的獨(dú)能力。

使用我們?nèi)娴姆核鼗瘷z測(cè)試劑盒輕松研究靶蛋白泛素化：無需質(zhì)譜

廣譜泛素化親和珠富集單泛素化和多泛素化

泛泛素抗體檢測(cè)廣泛的泛素化蛋白，包括K48、K63和M1多泛素鏈

Signal Seeker™泛素檢測(cè)試劑盒（10次測(cè)定）

信號(hào)導(dǎo)引頭泛素化檢測(cè)試劑盒（10次測(cè)定，免疫沉淀格式）

Signal Seeker™生產(chǎn)線的開發(fā)允許專家和非專家對(duì)關(guān)鍵的調(diào)節(jié)蛋白修飾進(jìn)行簡(jiǎn)單分析。全面的Signal Seeker™試劑盒提供了一個(gè)親和珠系統(tǒng)，用于從任何給定的細(xì)胞或組織裂解物中分離和富集修飾蛋白。然后使用靶蛋白的一級(jí)抗體通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)印跡程序分析富集的蛋白質(zhì)群體

產(chǎn)品用途包括

調(diào)查瞬態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)制

測(cè)量多途徑成員蛋白的信號(hào)事件

發(fā)現(xiàn)感興趣的蛋白質(zhì)的新修飾

深入了解監(jiān)管機(jī)制

測(cè)量?jī)?nèi)源性或瞬時(shí)表達(dá)的蛋白質(zhì)信號(hào)事件

試劑盒內(nèi)容

泛素試劑盒包含以下成分：

裂解和蛋白質(zhì)定量步驟IP和預(yù)澄清步驟洗滌步驟洗脫步驟西方步驟

BlastR™裂解緩沖液

BlastR™稀釋緩沖液

BlastR™過濾器

蛋白酶抑制劑雞尾酒

去泛素酶抑制劑Cocktail

Precision Red™蛋白質(zhì)測(cè)定試劑

泛素親和珠

泛素控制珠

BlastR™沖洗緩沖液

旋轉(zhuǎn)柱

珠子洗脫緩沖液

化學(xué)發(fā)光試劑A

化學(xué)發(fā)光試劑B

抗泛素HRP抗體

示例結(jié)果

這些試劑盒有許多應(yīng)用（見下一節(jié)），我們?cè)谶@里描述Rac1蛋白的一個(gè)有趣應(yīng)用：

應(yīng)用1：調(diào)查高度瞬態(tài)調(diào)節(jié)事件

已知包括Rac1在內(nèi)的Rho蛋白家族的活性部分通過泛素化（也稱為泛素化）事件來調(diào)節(jié)，泛素化事件可通過修飾蛋白的降解和/或定位導(dǎo)致信號(hào)通路調(diào)節(jié)（Visvikis，O.等人，2010）。生物細(xì)胞102:377-389。Nethe，M.和Hordijik，P.2010。細(xì)胞科學(xué)雜志。123: 4011-4018). 在許多情況下，Rac1的GTP結(jié)合活性形式是泛素化的優(yōu)選底物。例如，已經(jīng)表明用細(xì)菌毒素CNF1處理的細(xì)胞導(dǎo)致Rac1的組成型激活以及隨后的單泛素化和多泛素化（Pop，M.等人，2004。J.生物學(xué)?；瘜W(xué)。279: 35840-35848).

使用Signal Seeker™泛素化檢測(cè)試劑盒（Cat#BK161），我們檢測(cè)了用CNF1毒素（Cat#CN04）處理的3T3細(xì)胞中內(nèi)源性Rac1的泛素化，發(fā)現(xiàn)從300μg 3T3細(xì)胞裂解物中可以檢測(cè)到Rac1的單泛素化和多泛素化。該試劑盒提供了一個(gè)用戶友好的工具來檢查任何靶蛋白的單泛素化和多泛素化。

圖1:Swiss 3T3細(xì)胞用MG-132預(yù)處理，然后未處理或用CNF1（CN04）處理3小時(shí)，然后用BlastR緩沖液裂解。BK161試劑盒用于在每種條件下對(duì)300μg裂解物進(jìn)行IP。泳道1：3μg輸入未處理的裂解物，泳道2：泛素親和珠（UBA01）加未處理的溶胞產(chǎn)物，泳道3：UBA01加CN04處理的裂解產(chǎn)物，泳路4：泛素對(duì)照珠（CUB02）加未經(jīng)處理的裂解液，泳道5：CUB02加CN04處理的裂解產(chǎn)物。使用抗Rac1抗體分析樣品的Rac1泛素化。

在這一研究領(lǐng)域可以嘗試的其他實(shí)驗(yàn)包括：

•參與Rac1單泛素化和多泛素化的泛素酶或去泛素酶的藥理學(xué)研究

•研究在各種不同生長(zhǎng)因子或藥物治療下Rac1激活和泛素化之間的關(guān)系。

•檢查泛素化Rac1與效應(yīng)物的相互作用。

•檢查泛素化Rac1和Rac1的其他調(diào)節(jié)性PTM之間的串?dāng)_。

欲了解更多信息，請(qǐng)聯(lián)系： cytoskeleton

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品：

Signal Seeker™磷酸氨酸檢測(cè)試劑盒（目錄號(hào)BK160）

Signal Seeker™SUMOylation 2/3檢測(cè)套件（類別號(hào)BK162）

Signal Seeker™：BlastR™快速裂解物制備試劑盒（目錄號(hào)BLR01）

Signal Seeker™泛素親和珠（類別號(hào)UBA01B珠）

Signal Seeker™：PTMtrue™泛素抗體（目錄號(hào)AUB01）

Signal Seeker™乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒（30份測(cè)定）

信號(hào)導(dǎo)引頭乙酰化檢測(cè)試劑盒（30次測(cè)定，免疫沉淀形式）

Signal Seeker™生產(chǎn)線的開發(fā)允許專家和非專家對(duì)關(guān)鍵的調(diào)節(jié)蛋白修飾進(jìn)行簡(jiǎn)單分析。全面的Signal Seeker™試劑盒提供了一個(gè)親和珠系統(tǒng)，用于從任何給定的細(xì)胞或組織裂解物中分離和富集修飾蛋白。然后使用靶蛋白的一級(jí)抗體通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)印跡程序分析富集的蛋白質(zhì)群體。

產(chǎn)品用途包括

調(diào)查瞬態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)制

測(cè)量多途徑成員蛋白的信號(hào)事件

發(fā)現(xiàn)感興趣的蛋白質(zhì)的新修飾

深入了解監(jiān)管機(jī)制

測(cè)量?jī)?nèi)源性或瞬時(shí)表達(dá)的蛋白質(zhì)信號(hào)事件

驗(yàn)證數(shù)據(jù)：乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒皮書

這些套件有許多應(yīng)用程序，這里我們描述一個(gè)有趣的例子：

應(yīng)用1：使用AAC02珠、AAC03珠或組合珠（AAC04珠）進(jìn)行總乙酰賴氨酸圖譜的免疫沉淀檢測(cè)——使用BK163試劑盒時(shí)，所有3種選擇都是可能的

使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠（50µl珠漿）對(duì)用脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細(xì)胞的乙?；鞍走M(jìn)行IP處理6小時(shí)。用AAC03-HRP抗體（1:3000）洗脫并通過蛋白質(zhì)印跡分析富集的乙?；鞍椎目倛D譜。使用小鼠IgG珠作為非特異性結(jié)合的對(duì)照（Cat#CIG02）。每個(gè)IP測(cè)定使用1 mg Cos-7裂解物。

應(yīng)用2：使用AAC02珠粒、AAC03珠?；蚪M合珠粒（AAC04珠粒）免疫沉淀靶特異性乙?；鞍?span>——使用BK163試劑盒時(shí)，所有3種選擇都是可能的

AAC03珠粒和AAC02珠粒（50µl珠漿）和1:1混合物（各25µl）AAC04珠粒用于脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細(xì)胞的乙酰化蛋白IP 6小時(shí)。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析，并使用LiCor-Empiria軟件對(duì)信號(hào)進(jìn)行定量。還進(jìn)行IP測(cè)定，并對(duì)小鼠IgG對(duì)照珠的信號(hào)進(jìn)行定量（印跡未顯示）。每個(gè)IP使用1 mg裂解物。

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