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湖南中科弘盛生物科技有限公司>>clover試劑盒>> (C/N: CE108)iElisa 磺胺二甲基嘧啶檢測試劑盒

iElisa 磺胺二甲基嘧啶檢測試劑盒

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  • 型號 (C/N: CE108)
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更新時間:2024-05-31 15:42:28瀏覽次數(shù):1117

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 農(nóng)業(yè)
主要用途 檢測
iElisa 磺胺二甲基嘧啶檢測試劑盒

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詳細介紹

iElisa 磺胺二甲基嘧啶檢測試劑盒

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1. 概要 本試劑盒是應(yīng)用 ELISA 技術(shù)研發(fā)的藥物殘留檢 測產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)比較,能經(jīng)濟、快速地檢測 出肌肉組織、蜂蜜、牛奶、血清等中的磺胺二甲基 嘧啶。 2. 原理 本試劑盒是利用競爭 ELISA 方法,在酶標板微 孔上預(yù)包被抗磺胺二甲基嘧啶抗原。檢測時,加入 標準品或樣品溶液,磺胺二甲基嘧啶抗體及酶標記 物,包被抗原和加入樣本中的磺胺二甲基嘧啶競爭 性地與磺胺二甲基嘧啶抗體結(jié)合后,再與酶標記物 形成抗原抗體復(fù)合物,用 TMB 底物顯色;加入反 應(yīng)終止液,在 450nm 波長酶標儀下進行檢測,樣品 中的磺胺二甲基嘧啶濃度與吸收光強度成反比。 與類似物的交叉反應(yīng)率: 磺胺二甲基嘧啶(SM2)……………………………100% 磺胺間二甲氧嘧啶(SDM)…………………………10% 磺胺甲基嘧啶(SM1 )………………………………12% 磺胺嘧啶 ( S D 或 S D Z ) …………………… … 4 % 磺胺甲噁唑(SMZ)……………………………………… 1% 3. 試劑盒組成 酶標板 1 塊,96 孔/板 標準液 6 瓶(1ml/瓶):0 ppb、1ppb、3ppb、9ppb、 27ppb、81ppb 抗體工作液 ………………………7ml 酶標記物 …………………………7ml 底物液 A …………………………7ml 底物液 B …………………………7ml 終止液 …………………………7ml 20X 濃縮洗滌液 ………………40 ml 2X 濃縮復(fù)溶液 ………………50 ml 說明書 ……………………………1 份 4. 需要的儀器、試劑 (1)設(shè)備 ……微孔板酶標儀(450nm) ……振蕩器、離心機 ……微量移液器:20μl~200μl,100μl~1000μl ……容量瓶:100ml,500ml,1000ml (2)試劑 ……乙酸乙酯、正己烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、 NaOH 、濃 HCL 、NaH2PO4·2H2O 樣本前處理需配制: 配液 1:0.2M NaOH 溶液 0.8gNaOH 用去離子水 100ml 溶解 配液 2:0.02M PB 緩沖液 稱取 2.58g Na2HPO4•12H2O 和 0.44g NaH2PO4• 2H2O 加去離子水 500ml 溶解。 配液 3:復(fù)溶工作液 2X 濃縮復(fù)溶液在使用前請按 1:1 稀釋 (1 份濃縮復(fù)溶液+1 份去離子水) 配液 4:洗滌液 將 40ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水稀釋 20×濃縮洗滌液在使用前請按 1:19 稀釋(1 份濃 縮洗滌液+19 份去離子水)(可按需配置, 稀釋后的 洗滌液可在 4℃保存一個月) 5. 樣品處理 樣本處理前須知 處理任何樣本時,都須注意: (1)實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的 試劑時要更換吸頭。 (2)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必 須使用潔凈實驗器具,以避免污染干擾實驗結(jié)果。 樣本處理步驟: (A)組 織(雞、鴨、豬肌肉/肝臟、雞蛋、魚、 蝦等) 1.稱取 3±0.05g 勻漿物置 50ml 離心管中,先加入 3ml 0.02M PB 充分振蕩混勻,再加入 4ml 乙酸 乙酯和 2ml 乙腈,充分振蕩 5min,于室溫 4000 轉(zhuǎn)/ 分以上速度離心 10min; 2.移取 2ml 上層有機相(約相當于 1g 的樣本)至 干凈玻璃試管中,在 56℃水浴下氮氣/空氣吹干; 3.加入 1ml 正己烷溶解干燥的殘留物,再加入 1ml 復(fù)溶工作液強烈振蕩混合 30s,室溫 4000 轉(zhuǎn)/分,離 心 5min。 4.去除上層有機相,取 50µl 下層用于分析。樣本稀釋倍數(shù):1 (B) 血清樣本 1、將血樣本于室溫放置 30min,于 10℃,4000 轉(zhuǎn)/ 分以上離心 10min,分離出血清或過濾血清; 2、取 1ml 血清,加入 3ml 0.02 M PB 緩沖液混合, 混合 30s; 3、取 50µl 用于分析。 樣本稀釋倍數(shù):4 (C)蜂蜜 1、 稱取 1±0.05g 蜂蜜樣本于 50ml 離心管中,加 入 1ml 0.5M 鹽酸 置于 37℃環(huán)境中 30min; 2、加入 2.5ml 0.2 M 氫氧化鈉 (將 PH 值調(diào)至 5 左 右)再加入 4ml 乙酸乙脂振蕩 5min,4000 轉(zhuǎn)/分以上 室溫離心 10min; 3、取 2ml 上層有機相至干凈玻璃試管中,于 56℃ 水浴下氮氣/空氣吹干,加 0.5ml 復(fù)溶工作液復(fù)溶, 強烈振蕩混合 30s; 4、取 50µl 用于分析。 樣本稀釋倍數(shù):1 (D)牛奶 1、 取 1ml 牛奶樣本用 0.02 M PB 緩沖液按 1︰19 (v/v)稀釋(即 20µl 牛奶+380µl 0.02 M PB 緩沖 液),混合 30s; 2、 取 50µl 用于分析。 樣本稀釋倍數(shù):20 6. 酶聯(lián)免疫分析程序 測定前須知: 1、使用之前將所有試劑和需用微孔板回升至室溫。 2、使用之后立即將所有試劑放回 2-8℃。 3、在使用中不要讓微孔干燥。 4、在 ELISA 分析中的重復(fù)性,很大程度上取決于 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定程序 中的要點。 5、在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用該 板膜蓋住微孔板。 測定步驟: 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,在室溫下平衡 30 分鐘,每種液體使用前均須搖勻。注意標準液均 需做 2 個平行試驗。 2、加標準品/樣本 50µl /孔到各自的微孔中,然后加 酶標記物 50μ l/孔,再加入 50µl /孔的抗體工作液, 輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板,37℃避光反應(yīng) 30min 。 3、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,加 洗滌液 250ml/孔,每次浸泡 15~30 秒,充分洗滌 4 -5 次,用吸水紙拍干。 4、顯色:每孔先各加入底物液 A 50μ l,再各加入 底物液 B 50μ l,輕輕晃蕩混勻,并在 37℃下避光 反應(yīng) 15 分鐘。 5、讀數(shù):每孔各加 50μ l 終止液,在酶標儀于 450nm 處測定 OD 值(建議用 450/630nm 雙波長檢測,在 5 分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù))。 7. 結(jié)果判定 1) 所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值 的平均值(B)除以*個標準(0 標準)的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以磺胺二甲基嘧啶準品濃度值(ppb)為 X 軸, 百分吸光度值為 Y 軸,繪制標準曲線圖。相對應(yīng)每 一個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。也可以用 回歸方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機專 業(yè)軟件,更便于大量樣品的快速分析。 2) 樣品的實際濃度為讀數(shù)結(jié)果乘以相應(yīng)稀釋倍 數(shù)。 8. 注意事項 1) 室溫低于20℃或試劑及標本未回到室溫(20- 25℃)會導(dǎo)致數(shù)值偏低。 2) 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥過久的情況, 則會出現(xiàn)標準曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn) 象。所以洗板排干后應(yīng)立即進行下一步操作。 3) 標準物質(zhì)和顯色液對光敏感,避免直接暴露在 光線下。 4) 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標準 液的時候都必需充分混合均勻)。 5) 反應(yīng)停止液為強酸性物質(zhì),避免接觸皮膚。 6) 不要使用過了有效期的試劑盒,也不要稀釋或 攙雜使用不同生產(chǎn)廠家的試劑盒這樣會引起 靈敏度降低。 7) 試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。 9. 檢測方法靈敏度、準確度、精密度 1) 試劑盒靈敏度:1ppb 2) 樣本低檢測限: 血 清………………4ppb 組織、蜂蜜………………………1ppb牛 奶………………………………20ppb 回收率: 血 清 …………………………90±10% 組織、蜂蜜……………………………85±10% 牛 奶……………………………80±10% 精密度: 試劑盒的變異系數(shù)均小于 10%

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