供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 農(nóng)業(yè) |
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主要用途 | 檢測 |
iElisa 卡那霉素檢測試劑盒
iElisa 卡那霉素檢測試劑盒
參考價 | 面議 |
更新時間:2024-05-31 15:47:09瀏覽次數(shù):1434
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iElisa 卡那霉素檢測試劑盒
iElisa 卡那霉素檢測試劑盒
1. 概要 卡那霉素是氨基糖甙類抗生素, 被廣范應(yīng)用于 動物疾病的治療,由于其具有神經(jīng)毒性和腎臟毒 性,損害第 8 對腦神經(jīng),導(dǎo)致前庭和耳蝸損傷,腎 毒性主要表現(xiàn)為近端身曲管損傷,出現(xiàn)蛋白質(zhì)尿、 血尿、腎功能減退等。目前,ELISA 檢測方法作為 卡那霉素殘留檢測的篩選方法已被廣泛使用。 本試劑盒是應(yīng)用 ELISA 研發(fā)的新一代藥物殘留 檢測產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、 準(zhǔn)確和靈敏度高等特點,操作時間僅需 30 分鐘,能 大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。 2. 原理 本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法,在酶標(biāo)板 微孔條上預(yù)包被卡那霉素抗體,樣本中殘留的卡那 霉素將和酶標(biāo)抗原競爭包被在酶標(biāo)板上的抗卡那 霉素抗體,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與殘留 物卡那霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘 以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出待檢中卡那霉素的 含量。 3. 試劑盒組成 1) 包被有抗體的96微孔板:1塊(96 孔,12 條×8 孔) 2) 卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)品: 0 、0.2、0.5、1.0、3.0ng/ml 1 瓶× 1.0ml 3) KAN酶標(biāo)抗原: 1 瓶 × 15ml 4) 10× 濃縮洗滌液: 1 瓶 × 50ml 5) 稀釋緩沖液: 1 瓶 × 50ml 6) 顯色底物: 1 瓶 ×13ml 7) 終止液: 1 瓶 × 7ml 8) 試劑盒說明書 9) 稀釋孔板: 1塊(96 孔) 10) 質(zhì)檢報告 4. 需要的儀器、試劑 1)儀器 —酶標(biāo)儀 450nm(iElisa 全自動酶標(biāo)儀或相當(dāng)者) —微量移液器 20μl~200μl,100μl~1000μl —25ml 錐形瓶或 50ml 離心管 —8 道微量移液器 —酶標(biāo)板振蕩器 —天平:感量 0.01g 2) 試劑 —蒸餾水 —pH7.4 PBS 溶液 —0.1mol/mL HCl、0.1 mol/mL NaOH 5 溶液的配制 洗滌液的配制:將濃縮洗滌液用去離子水稀釋 10 倍后使用(1 份濃縮洗滌液加 9 份蒸餾水)。 6. 樣品處理 6.1 牛奶樣品 1) 取 10 mL 牛奶樣品于 50 mL 離心管中,4000 r/min 離心去蛋白。 2) 去除上層脂肪,吸取 20μl 中間層置于 1.5ml 離 心管中,加入 980μlKAN 稀釋緩沖液,用渦旋 混合器混勻。 3) 取樣品稀釋液 50μL 于 ELISA 進(jìn)行檢測。 稀釋倍數(shù):50 6.2 動物源性食品(豬肉,豬肝,牛肉等) 1) 稱取勻漿后的樣品 5g,加入 20mL 樣品提取液 (pH7.4 PBS 溶液),搖床振蕩 30min。 2) 靜置 1min,3000/min 離心 10min。吸取 50μl 取上清液于 1.5ml 離心管中,加入 450μl KAN 稀釋緩沖液, 用渦旋混合器混勻。 3) 取樣品稀釋液 50μL 于 ELISA 進(jìn)行檢測 稀釋倍數(shù):40 6.3 凍干藥品 取 10mg 樣品,用 1ml 樣品復(fù)溶液復(fù)溶樣品,用 0.1 mol/mL HCl 或 0.1 mol/mL NaOH 調(diào)整溶液 pH 值在 6.0-8.0 之間,取 50μl 檢測。 稀釋倍數(shù):1 6.4 血液樣品 取血漿過夜(4℃), 4000r/min 離心 10 分鐘, 取上清液,用稀釋緩沖液按 1:19 的比例離心后上清液 (吸取 50μl 過濾液,加入 950μl 稀釋液緩沖 液)。 稀釋倍數(shù):20 7. 酶聯(lián)免疫分析程序 7.1 測定之前注意事項 1) 使用前將所有試劑平衡至室溫(20-25℃)。 2) 使用后迅速將試劑放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定 程序中的要點。 4) 所有孵育過程應(yīng)避免陽光直射,并按要求用蓋 板覆蓋住酶標(biāo)板。 7.2 測定程序 1) 將足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品所用數(shù)量的稀釋孔板放 于板架上。 2) 將同等數(shù)量的包被有抗體的微孔板插入另一 板架,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個平行實驗,記錄下 標(biāo)準(zhǔn)和樣品的位置。未使用的酶標(biāo)板用鋁箔袋 封好置 2-8℃冷藏保存。 3) 分別吸取 75μl 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加至相應(yīng)的空的 微孔(雙孔)中,然后各加入 75μl 的 KAN 酶 標(biāo)抗原(可用排槍),將移液器調(diào)至 100μl,每 孔混勻 5 次后,吸取 100μl 混合的溶液,加入 到包被有抗體的酶標(biāo)板架中(可用排槍),在 37℃溫育 30min(每個標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新 的吸頭)。 4) 倒出孔中的液體,將微孔架倒置在吸水紙上拍 打以保證*除去孔中的液體,然后每孔加入 250μl 稀釋好的洗滌液洗滌,振蕩后倒出孔中 的液體,拍干;重復(fù)操作四次,洗板時每次間 隔20s,洗完后用力在吸水紙上排干。 5) 每孔加入100μl顯色底物,37℃避光溫育10min。 6) 每孔加入50μl 終止液,混勻。 7) 置于酶標(biāo)儀中,振蕩混勻,在450nm處測定吸 光度值(OD值),參比波長630nm。(iElisa全 自動酶標(biāo)儀可以直接讀出、打印濃度值)。 8. 結(jié)果判定 1) 所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值 的平均值(B)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸 光度值(B0)再乘以 100%,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×100% B0 以卡那霉素準(zhǔn)品濃度值(ppb)為 X 軸,百分 吸光度值為 Y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。相對應(yīng)每一個 樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。也可以用回歸 方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機(jī)專業(yè)軟 件,更便于大量樣品的快速分析。 2) 樣品的實際濃度為讀數(shù)結(jié)果乘以相應(yīng)稀釋倍 數(shù)。 3) 如果測定值超出檢測范圍,樣品提取溶液按一 定的比例用 pH7.4 PBS 進(jìn)行稀釋。 9. 注意事項 1) 室溫低于20℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20- 25℃)會導(dǎo)致數(shù)值偏低。 2) 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥過久的情況, 則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn) 象。所以洗板排干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 3) 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和顯色液對光敏感,避免直接暴露在 光線下。 4) 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標(biāo)準(zhǔn) 液的時候都必需充分混合均勻)。 5) 反應(yīng)停止液為強(qiáng)酸性物質(zhì),避免接觸皮膚。 6) 不要使用過了有效期的試劑盒,也不要稀釋或 攙雜使用不同生產(chǎn)廠家的試劑盒這樣會引起 靈敏度降低。 6) 試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。 10. 檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 1) 試劑盒靈敏度: 0.2ppb 2) 試劑盒變異系數(shù):小于 20%。 3) 試劑盒準(zhǔn)確度:回收率范圍在 70%-120%之 間。