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產(chǎn)品簡介
著色霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fonsecaea spp. |
貨號 | CP934246 |
著色霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是著色霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
對磺基苯偶氮變色酸鈉 細(xì)胞蛋白表達(dá)熒光定量檢測試盒-LEPTIN
3--4-苯腈 蛋白表達(dá)西方雜交分析試盒-LEPTIN
4-基鄰苯二酸 蛋白免疫共沉淀分析試盒-LEPTIN
(S)-1-Cbz-3-氨基吡咯鹽酸鹽 細(xì)胞/組織裂解懸液、血液、體液等蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試盒-LEPTIN
3-氟-5-羥基苯酸 FITC綠色熒光標(biāo)記一抗
3-苯酰腈TRITC紅色熒光光標(biāo)記一抗
4'-正戊基-4-氰基聯(lián)苯HRP標(biāo)記一抗
2-(4-代苯基)-2-基酸通用細(xì)胞載玻片制備試盒
2-硝基-4-砜基苯細(xì)胞免疫熒光顯微鏡基礎(chǔ)檢測試盒（無一抗和二抗）
1-(氧基氧基)萘細(xì)胞免疫熒光顯微鏡間接檢測試盒（含熒光二抗）
3,4-二氟三氟苯細(xì)胞免疫熒光顯微鏡*間接檢測試盒（含一抗和熒光二抗）
3-基磺酸鈉免疫熒光細(xì)胞流式儀基礎(chǔ)檢測試盒（無一抗和二抗）
4-羥基-2,2,6,6-四基哌啶1-氧基自由基免疫熒光細(xì)胞流式儀間接檢測試盒（含熒光二抗）
著色霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒N-基對基苯璜酰胺免疫熒光細(xì)胞流式儀*間接檢測試盒（含一抗和熒光二抗）固相內(nèi)素清除Surface Endotoxin Erasol常溫100g
固相內(nèi)素清除Surface Endotoxin Erasol常溫500g
固相RNase清除Surface RNase Erasol常溫100mL
固相RNase清除Surface RNase Erasol常溫250mL
固綠Fast Green FCF室溫干燥保存5g
固藍(lán) RR 鹽Fast Blue RR Salt-20℃保存5g
固藍(lán) BB 鹽Fast Blue BB Salt -20℃避光保存5g
鈷柱介質(zhì)Co-Agarose Resin4℃保存10mL
骨骼肌細(xì)胞生長因子Growth Factor For Cell Culture-20℃保存5mL
谷胱甘肽一還原酶測試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存50 T