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產(chǎn)品簡介
巨球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Macrococcus spp. |
貨號 | CP934417 |
巨球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，產(chǎn)品僅用于科研報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是巨球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
2,3-二基-1-戊烯小量酵母細(xì)胞*轉(zhuǎn)化試盒
2,3-二-1-烯大量（文庫）酵母細(xì)胞*轉(zhuǎn)化試盒
2,4,4-三基-1-戊烯酵母細(xì)胞質(zhì)粒提取試盒
2,4-二基-1-戊烯酵母菌斑雜交試盒
2,4-己二烯真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試盒
2,5-降冰片二烯真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測試盒
2-氨基-1,3,3-三氰基-2-烯真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試盒
2-基-1,3-二烯小量真菌/酵母細(xì)胞基因組DNA純化試盒
2-基-2-烯中量真菌/酵母細(xì)胞基因組DNA純化試盒
巨球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2-基烯大量真菌/酵母細(xì)胞基因組DNA純化試盒
2-烯裂解液IX：真菌/酵母細(xì)胞裂解液
3,17α-二羥基-1,3,5(10)雌甾三烯裂解液IX：真菌/酵母細(xì)胞*裂解液
3,3-二氧基-1-烯真菌/酵母細(xì)胞可溶性總蛋白制備試盒
3-基-1-烯真菌/酵母細(xì)胞可溶性總核蛋白制備試盒
3-基-1-烯真菌/酵母細(xì)胞漿可溶性總蛋白制備試盒pHelperpHelper低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHD_v2pHD_v2低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHCMC05pHCMC05低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHCMC04pHCMC04低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHANNIBALpHANNIBAL低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pHag cmv2pHag cmv2低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pGZpGZ低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pG-Tf2pG-Tf2低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pGTf2pGTf2低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug
pGro7pGro7低溫運(yùn)輸，-20℃保存2 ug