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“兩蟲”檢測(cè)知多少？
1.什么是兩蟲？
賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲是一類寄生于人體和動(dòng)物體內(nèi)的腸道致病性寄生蟲。
2.感染兩蟲的危害
賈第鞭毛蟲孢囊和隱孢子蟲卵囊屬于病原微生物的休眠體，能夠抵御外界不良環(huán)境，并且能夠耐受常規(guī)水處理中的氯消毒，因此在水環(huán)境中具有較長(zhǎng)的存活時(shí)間和潛伏期。
賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲引起的消化道感染在世界范圍內(nèi)普遍存在。人或動(dòng)物通經(jīng)水源性或食源性感染“兩蟲"后，主要癥狀為腹痛、腹瀉、腹脹、嘔吐、發(fā)熱和厭食等，典型病人表現(xiàn)為以腹瀉為主的吸收不良綜合征，腹瀉呈水樣糞便，量大、惡息、無膿血。兒童患者可由于腹瀉，引起貧血等營(yíng)養(yǎng)不良，導(dǎo)致生長(zhǎng)滯緩。對(duì)于患有 AIDS 等免疫功能缺陷者，臨床表現(xiàn)為持續(xù)性難以控制的腹瀉，若不及時(shí)對(duì)癥治療，將有70%的患者將因此脫水而死。
3.檢驗(yàn)方法
2006年，我國(guó)將“兩蟲"指標(biāo)納入國(guó)家飲用水檢測(cè)指標(biāo)，國(guó)標(biāo)中兩蟲檢驗(yàn)方法為免疫磁分離熒光抗體法，2022年我國(guó)發(fā)布了飲用水新國(guó)標(biāo)GB 5749-2022，代替了06年的飲用水檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，新標(biāo)準(zhǔn)中針對(duì)兩蟲檢測(cè)新增了檢驗(yàn)方法-濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法。
基于標(biāo)準(zhǔn)限值要求，目前水中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的檢測(cè)方法主要分為三個(gè)步驟：濃縮富集、分離純化和染色鏡檢。其中，濃縮富集和分離純化是影響檢測(cè)方法成本和回收率的關(guān)鍵步驟。
3.1免疫磁分離熒光抗體法
免疫磁分離熒光抗體法源自EPA 1623，檢測(cè)設(shè)備和試劑耗材依賴進(jìn)口。
它的濃縮方法為濾囊/濾芯過濾法，可以用較高的流速處理大量水樣，但由于孢囊/卵囊的黏附作用而導(dǎo)致部分孢囊/卵囊難以洗脫，并且濾囊/濾芯約 2500～3000 元/樣，檢測(cè)成本高昂。免疫磁分離法根據(jù)特異性的抗原抗體反應(yīng)具有較好的純化效果，該方法中使用的磁珠約 500 元/樣，成本相對(duì)較高。
3.2濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法
濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法針對(duì)高濁度水采用沉淀離心和低濁度水采用膜過濾溶解純化的方法，實(shí)現(xiàn)替代被美國(guó)壟斷的囊過濾的純化方法，打破美國(guó)的專利布局壟斷，擁有完整的兩蟲檢測(cè)新方法，檢測(cè)成本僅為美國(guó)EPA 1623方法的20%；
該方法在2011-2015年完成全國(guó)供水行業(yè)內(nèi)部測(cè)試，2018年被納入住建部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《城鎮(zhèn)供水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》CJ/T 141-2018；2018-2019年順利完成衛(wèi)健委組織國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》GB/T 5750修訂所必須的全國(guó)驗(yàn)證，已被納入新版國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法。
絮凝沉淀法對(duì)于孢囊/卵囊的濃縮具有很好的效果，針對(duì)濁度大于等于 20 NTU 的水樣采用此濃縮方法。濾膜溶解法是一種對(duì)于孢囊/卵囊具有較高回收率的濃縮方法，不僅能有效降低膜上附著物質(zhì)在轉(zhuǎn)移過程中的損失，并且可以解決濾囊/濾芯過濾法成本較高和孢囊/卵囊難以洗脫的問題，針對(duì)濁度小于20 NTU 的水樣即采用此法。
密度梯度離心法是將 Percoll 與蔗糖混合作為密度梯度離心介質(zhì)，使用后在確保較好回收率的同時(shí)降低了試劑成本。
4.總結(jié)
2022新標(biāo)準(zhǔn)中采用的濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法，該方法在保障 GB/T 5750-2006 方法回收率的基礎(chǔ)上，降低設(shè)備投入 75%，降低耗材成本 85%，使隱孢子蟲檢測(cè)成本從 3000 元/樣品降低到 300 元/樣品。
綜合我國(guó)現(xiàn)有檢測(cè)方法，濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法具有穩(wěn)定可靠、成本低廉、檢測(cè)靈敏的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于生活飲用水中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法的建立具有參考價(jià)值。