BL21是最早開發(fā)的用于原核表達(dá)的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達(dá)菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達(dá)，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(dá)(如：pET系列)；但含有大腸桿菌RNA聚合酶，適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)(如：pGEX，pMAL質(zhì)粒)。其中ompT可減少外膜蛋白酶的表達(dá)

產(chǎn)品概述

產(chǎn)品描述

BL21是最早開發(fā)的用于原核表達(dá)的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達(dá)菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達(dá)，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(dá)(如：pET系列)；但含有大腸桿菌RNA聚合酶，適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)(如：pGEX，pMAL質(zhì)粒)。其中ompT可減少外膜蛋白酶的表達(dá)量，從而減少重組蛋白的水解，提高表達(dá)產(chǎn)量；hsd基因變異可致菌株細(xì)胞內(nèi)的I型限制酶EcoK或EcoB活性缺失，從而提高PCR產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率。BL21感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)107 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品優(yōu)勢

? 高轉(zhuǎn)化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
? 適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)

產(chǎn)品組分

基因型：E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)

 

產(chǎn)品應(yīng)用

BL21感受態(tài)細(xì)胞適用于依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)(如：pGEX，pMAL質(zhì)粒)。

實(shí)驗(yàn)流程

1. 解凍感受態(tài)細(xì)胞：從-80 ℃取感受態(tài)細(xì)胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，約5-10 min，放置時(shí)間過長會影響轉(zhuǎn)化效率。

2. DNA樣品的轉(zhuǎn)化：每100 μL感受態(tài)加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品(例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等)約10 μL，然后輕輕彈擊管底約2-3次，立即冰上靜置孵育30 min。

? 加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品體積通常不宜超過感受態(tài)細(xì)胞體積的10%。
? 加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品后應(yīng)輕柔操作，避免使用移液槍吹打混勻。
? 如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，冰浴靜置約10 min后可以直接涂板并培養(yǎng)過夜；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議冰浴靜置30分鐘并嚴(yán)格執(zhí)行后續(xù)的熱激處理和復(fù)蘇培養(yǎng)等步驟，以提高轉(zhuǎn)化效率。

3. 熱激處理：將冰浴后的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰水浴中靜置2-3 min以快速冷卻。

? 熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過程中請勿晃動離心管。

4. 復(fù)蘇培養(yǎng)：加入900 μL 37℃預(yù)熱的LB或SOC培養(yǎng)基，顛倒數(shù)次混勻，37℃搖床約220 rpm復(fù)蘇培養(yǎng)45 min。

5. 收菌涂板：如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，建議直接取50-100 μL進(jìn)行涂板即可；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議先5000 g，1 min室溫離心沉淀細(xì)菌，吸除約900-950 μL上清，然后用剩余的約50-100 μL菌液重懸，涂布到含相應(yīng)抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養(yǎng)：將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

? 培養(yǎng)前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

保存條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存。

相關(guān)參數(shù)