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詳細介紹
產(chǎn)品簡介
發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠
感染 大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.A4 發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型
Ri 質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，胡蘿卜，甘草等），同時具有卡那m素抗性。本公
司生產(chǎn)的 Ar.A4 化學轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pK7WGF2 質(zhì)粒（壯觀m素抗性）檢測，轉(zhuǎn)
化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Ar.A4
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
10 ×100 μL
100 ×100μL
定制
基因型：Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)
存儲條件
-80 ℃保存; 請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5 分鐘，使
乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，冰
中靜置 5 分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中 5分鐘，待其融化，加入 0.01-1 μg質(zhì)粒 DNA（體積不大于 6ul），
用手撥管底混勻，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，
空管保留待用。
3. 啟動電轉(zhuǎn)儀，設置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)為 Biorad 推薦，使用者也可按
所用電轉(zhuǎn)儀推薦的 protocol 操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中，加入 900 μl
無抗生素的 LB 并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 LB 或 YEB
平板上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天（當平板只含有 50 μg/ml kan 時，28℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中
同時加入 50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時，需 28℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml rif 則需要 28℃
培養(yǎng) 72-90 h）。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 利f平濃度不應高于 25ug/ul，過高的利f平濃度不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。
4. Ar.A4 具有卡那m素抗性，不可用于具有卡那m素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。
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