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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Rosetta 2(DE3) pLysS 來(lái)源于 Rosetta(DE3)，本菌株含有 pLysSRARE2 質(zhì)粒，除了能夠提供原
Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個(gè)稀有密碼子的 tRNA 外，還
提供了第七個(gè)稀有密碼子 CGG 的 tRNA。Rosetta2(DE3)pLysS 載體通過(guò)提供稀有密碼子，使得該宿
主菌相對(duì)于其他大腸桿菌，能夠提供更加“通用"的蛋白質(zhì)表達(dá)，從而提升目的蛋白表達(dá)水平。DE3
是溶源性的 λDE3, 所以帶有 T7 RNA 聚合酶的染色體拷貝，故而適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟
動(dòng)子系列載體。該菌株含有 pLysSRARE2 質(zhì)粒，除了提供稀有密碼子外還能夠產(chǎn)生 T7 溶菌m，可
以有效降低目的基因的基礎(chǔ)表達(dá)水平。同時(shí)，pLysSRARE2 質(zhì)粒具有氯m素抗性。此外，
pLysSRARE2 質(zhì)粒的起始復(fù)制位點(diǎn)是 p15 Origin, 這使得該質(zhì)粒能夠和 pUC-及 pBR322-衍生的質(zhì)粒
互相共存。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)， Rosetta 2 (DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg
DNA 以上。
產(chǎn)品組成
組分
Rosetta 2(DE3)pLysS
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3) pLysSRARE2 (CamR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pLysSRARE2 外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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