化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
產(chǎn)品簡介
Origami 2 系列菌株是由 K-12 菌株衍生而來，在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase
(gor)基因上同時含有突變，這使得該菌株能夠更加高效地表達含二硫鍵的蛋白。與 Origami 系列菌
株相比，Origami 2 對卡那抗生素敏感，因而能夠用于含卡納抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。該菌株攜帶的 gor
基因突變使得其和原來的 Origami(DE3)菌株一樣具有四環(huán)素抗性。該菌株含有溶源的 λDE3 序
列，可表達 T7 RNA 聚合酶，因而適用于 pET 系列及其他 T7 啟動子系列載體。該菌株含有的
pLysS 質(zhì)粒（氯m素抗性）能夠產(chǎn)生 T7 溶菌m，可以有效降低目的蛋白的本底表達水平。pLysS
質(zhì)粒的起始復(fù)制位點是 p15 Origin, 這使得該質(zhì)粒能和 pUC-及 pBR322-的衍生質(zhì)粒共存。經(jīng) pUC18
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，Origami 2 (DE3)pLysS 感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率可達 107 cfu/μg DNA 以上。
產(chǎn)品組成
組分
Origami 2 (DE3)pLysS
感受態(tài)細胞
10 × 100μL
100 × 100μL
定制
基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F ’ [lac+ lacIq pro] (DE3) gor522::Tn10
trxB pLysS (CamR, StrR, TetR)
存儲條件
-80 ℃保存，請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pLysS 質(zhì)粒外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
化工儀器網(wǎng)