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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
JM109(DE3)菌株來(lái)源于 JM109，用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7 啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如 pET 系
列)的基因。λ 噬菌體 DE3 區(qū)含有 T7 噬菌體 RNA 聚合酶，該區(qū)整合于 JM109 的染色體上，所以稱
為 JM109(DE3)。可同時(shí)表達(dá) T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶，用于 pET 系列，pGEX，
pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。JM109(DE3)菌株不可用于藍(lán)白斑篩選試驗(yàn)。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)，
JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
JM109(DE3)
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk- mk+ ) relA1 supE44 Δ(lac-proAB) [F? traD36 proAB laqIqZΔM15](DE3)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pRARE 外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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