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詳細介紹
產(chǎn)品簡介
BL21(DE3)/pLysS 菌株攜帶 pLysS 質(zhì)粒，具有氯m素抗性。pLysS 含有表達 T7 溶菌m的基因，T7 溶菌m
可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾
IPTG 誘導(dǎo)的表達，適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了 λ(DE3)序列，可表達 T7 RNA
聚合酶，適合于 T7 啟動子系列質(zhì)粒的蛋白表達。該感受態(tài)細胞經(jīng) pUC18 質(zhì)粒檢測，其轉(zhuǎn)化效率高達 108
cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
BL21(DE3)/pLysS
化學(xué)感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdS (rB-mB-) gal dcm (DE3) pLysS CamR
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
產(chǎn)品特性
-該菌株為 recA+基因型，故不用于質(zhì)粒的保存；
-屬于大腸桿菌 B 株系列，可用于以 T7 RNA 聚合酶為表達系統(tǒng)的蛋白表達；
-pLysS 含有表達 T7 溶菌m的基因，T7 溶菌m可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，能夠
降低目的基因的背景表達水平，但不干擾 IPTG 誘導(dǎo)的表達，適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。
質(zhì)量控制
除 pLysS 外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90 s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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