化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
大腸桿菌 JM110 菌株具有硫酸鏈m素抗性(StrR)；是甲基化基因 dam、dcm 缺失的菌株，從該菌株
中提取得到的質(zhì)粒 DNA，可被對(duì) dam 和 dcm 甲基化敏感的內(nèi)切酶切割；該菌株攜帶的
lacIq lacZΔM15 突變使其可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選。但由于該菌株的轉(zhuǎn)化效率不太高，一般不用于質(zhì)粒
構(gòu)建的宿主，而是用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化以便進(jìn)行質(zhì)粒去甲基化。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)，JM110 感受態(tài)
細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107 cfu/μg DNA 以上。
產(chǎn)品組成
組分
JM110
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36
proAB lacIq lacZΔM15]
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
化工儀器網(wǎng)