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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
GT115 菌株，是專門用來克隆含有發(fā)夾結(jié)構(gòu)（Hairpin）或重復(fù)序列等 DNA 二級結(jié)構(gòu)的基因序列的
大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種 SbcCD 蛋白復(fù)合體，可以識別 DNA 發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并將其切除；
將 sbcC 和 sbcD 兩個基因突變，便增強(qiáng)了發(fā)夾結(jié)構(gòu) DNA 的穩(wěn)定性。同時在大腸桿菌基因組中引入
uidA(?MluI)::pir-116，使 GT115 可以表達(dá) π 蛋白，從而讓含有 R6Kg ori 復(fù)制子的質(zhì)粒（如 pCpG
mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA等）可以在該菌株中正常復(fù)制。該菌株還含有具有核酸酶 (endA)突
變、重組酶 (recA)突變，因此可以增強(qiáng)外源 DNA 的穩(wěn)定性。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，GT115 感受
態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
GT115
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ?M15?lacX74 recA1 rpsL (StrR ) endA1 ?dcm uidA (?MluI)::pir-116
?sbcC-sbcD
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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