產(chǎn)品簡介
EPI300 細(xì)胞含有一個(gè)突變的 trfA 基因，該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有 oriV 復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷
貝擴(kuò)繁，誘導(dǎo)劑Ⅰ可以誘導(dǎo) trfA 基因的表達(dá)。當(dāng)含有 oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的 EPI300 細(xì)胞在 LB/2YT 或 SOB 培
養(yǎng)基中生長時(shí)，trfA 基因的表達(dá)被抑制，oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平；當(dāng)在培養(yǎng)基中加入
CopyMore 300 誘導(dǎo)劑時(shí)，oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此，
EPI300 菌株可以降低 oriV 復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr
hsdRMS-mcrBC]基因型使 EPI300 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA（例如：哺乳動(dòng)物
基因組 DNA）。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。lacZΔM15 標(biāo)
記的存在使 EPI300 可用于藍(lán)白斑篩選，rpsL 賦予其鏈m素抗性。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，EPI300 感受態(tài)
細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
EPI300
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galK λ– rpsL nupG
trfA dhfr
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90 s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
EPI300 化學(xué)感受態(tài)
#CC961634. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
化工儀器網(wǎng)
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